Horváth László (szerk.): Halbiológia és haltenyésztés (Mezőgazda Kiadó, Budapest, 2000)
1. Biológiai alapismeretek - 1.4 Orbán László: Molekuláris eljárások alkalmazása a haltenyésztésben
ß) © 26. ábra. A) DNS fragmentek elválasztása vízszintes agaróz gélen végzett elektroforézissel. A DNS mintákat a gélben kialakított mintafelvivő árkokba pipettázzák bele (bal oldali kép). A minta glicerint tartalmaz, ezért lesüllyed az árok aljára, a benne levő festék pedig a mintafelvitel és az elválasztás során jól láthatóvá teszi a mintát. A rendszerre kapcsolt feszültség hatására a negatív össztöltésű DNS fragmentek vándorolni kezdenek az anód irányába, vándorlási távolságuk fordítottan arányos méretükkel, azaz a kisebb messzebbre jut a gélben. A detektálás speciális festékkel történik, mely a DNS két szála közé beépülve ultraviola fényben láthatóvá teszi a DNS frag- menteket. Restrikciós enzimekkel feldarabolt plazmid DNS elválasztásakor csíkmintázat keletkezik (középen), míg a genomiális DNS hasításakor előállított fragmentek nem képeznek a gélen mintázatot, hanem tág mérethatárok között elhelyezkedő, elkenődött szakaszt alkotnak (jobbra). B) Az elhasított és gélen elválasztott genomiális DNS mintákat tartalmazó gélről (balra) ún. blottolassal membrán-replikát készítenek, a membránt jelölt próbát tartalmazó oldatban inkubálják (Southern hibridizáció; középen), majd a fel nem kötődött próbát mosással eltávolítják. A sikeres hibridizáció helyét a membránon (jobbra) megjelenő csíkok jelzik 1.4.2.6. A polimeráz láncreakció A DNS markerek igazán hatékony és széleskörű alkalmazását a polimeráz láncreakció (Polymerase Chain Reaction, PCR) megjelenése tette lehetővé. A PCR egy olyan molekuláris biológiai eljárás, mellyel DNS szakaszokat, így például DNS markereket lehet szelektíven sokszorozni és a genom többi részétől függetlenül vizsgálni. Mindezt egy hőforrásokban élő baktériumból a nyolcvanas évek elején izolált Taq DNS polimeráz 147 Gél Membrán Film Jelölt próba Jelzőfesték Mintafelvitel
