Szemészet, 2019 (156. évfolyam, 1-4. szám)
2019-09-01 / 3. szám
Amnionmembrán-szuszpenzió és saját savó szemcseppek hatása 10%, 15% és 30%), AMS-t (15%, 30% oder 100%) vagy AMH-t (15%, 30%) adtunk a kultúrmédiumhoz és a sejttenyészeteket 24 órán át inkubáltuk. A proliferációt fotometrikusan, ELISA segítségével határoztuk meg. A migráció vizsgálatakor a HCEC-t 6-lyukú szövettenyésztő edényben tenyésztettük, amíg konfluens sej tréteget kaptunk. Ezután egy sárga pipettavéggel egy „sebvonalat" alakítottunk ki minden tenyészetben és AS-t, AMS-t vagy AMH-t adtunk hozzájuk. A migrációt 9 órán keresztül fényképesen rögzítettük. A „sebvonal” méretének változását a „GNU Image Manipulation Programs”-mal határoztuk meg. E mellett DMEM/F12 kultúrmédiumot 5%, 10%, 15% és 30% FCS-sel is használtunk. A proliferációs ráta magasabb volt a 15%-os mintában, mint 30%-os szérum használatakor (p<0,001, generalized linear model (GLM)). 100% AMS, 15% és 30% AMH lassították az epithelsejtek prolife rá cióját a kontrollokhoz képest (p<0,002 mindkettő), míg a 15%-os és 30%-os AMS nem gyakoroltak a proliferációra hatást. HCEC-k migrációja gyorsabb volt a 30%-os mintában, mint 5%-os humán szérumban (p<0,01, GLM). A kontrollokhoz képest a migrációs ráta 15%-os és 30%-os AMS használatakor fokozódott (p<0,001), de nem mutatott változást 15%-os és 30%-os AMH alkalmazásakor (p=0,153 és p=0,083). Megbeszélés Eredményeink a 15%-os és a 30%os AMS epithelsejt-migrációra gyakorolt pozitív hatását mutatják. AS alkalmazásakor az epithelsejt-migráció 15%-os koncentráció esetén fokozódik. Korábbi tanulmányunkban beszámoltunk arról, hogy növekedési faktorok mintegy 4 héten át szabadulnak fel az amnionmembránból (13), amely arra utal, hogy az amnionmembrán-transzplantáció nemcsak mechanikus védelmet biztosít a szemfelszínnek, hanem növekedési faktorok és interleukinek kibocsátásával tudja támogatni a sebgyógyulást. Ezért érdemes amnionmembrán-szuszpenzióból készült szemcseppeket alkalmazni hasonló időtartamig, mint ahogyan az AMT hatásos. A szuszpenzió alkalmazásakor a szaruhártya hámosodását réslámpával nyomon is követhetjük, szemben amnionmembrán-patch alkalmazásával, hiszen ilyenkor a patchen keresztül a szaruhártya változásait nem lehet megfigyelni. Ugyanakkor AMS- vagy AMH- szemcseppek készítése esetén, az Országos Gyógyszerészeti és Élelmezés-egészségügyi Intézet (OGYÉI) engedélye az alkalmazás előtt elengedhetetlen. A szuszpenziós szemcseppek előállításakor a VIII. Magyar Gyógyszerkönyv iránymutatását kell alapul venni. A szemcseppek formulálása során alapvető elvárás, hogy a készítmény biokompatibilis legyen. Célunk, hogy csípő, szúró érzést ne okozzon, viszont a hatóanyag a gyógyszerformából felszabaduljon és kialakuljon a kívánt hatás. Szuszpenziók készítéséhez kizárólag injekcióhoz való desztillált víz használható. A szemcseppeknek minden körülmények között izotóniásan és izohidriásan kell készülniük. Sérült szem kezelésére használt szemcseppek nem tartalmazhatnak mikrobiológiai tartósítószert. Ezen készítményeket szigorúan steril eszközökkel aszeptikus körülmények között kell előállítani. A hipotóniás oldatok nátrium-kloriddal tehetők izotóniássá (A könnyel közel izotóniásnak tekinthető oldat ozmolaritása: 280-310 mOsm/1). A szemcseppek pH-értékét a hatóanyag stabilitásának és optimális fiziológiai hatásának figyelembevételével pH = 6,0-8,5 értékhatárok közé, de ha lehetséges, akkor a könynyel izohidriás pH = 7,2-7,4 értékre kell beállítani. A szuszpenziós szemcseppeknél viszkozitásnövelő anyagokat kell használni, amely nem haladhatja meg az 50 mPa* s értékét. Í136; X / A szuszpenziós szemcseppekben a szemcsék 80%-ának egyik lineáris mérete sem haladhatja meg a 25 gm-t és legfeljebb 20%-a eshet a 25-50 gm mérettartományba. Az egyes szemcsék, kristályok tű alakúak nem lehetnek. Idegen részecskék a szuszpenzióban nem lehetnek láthatók. A szuszpenziós szemcseppek makroszkóposán vizsgálva homogén eloszlásúak kell legyenek és az eltartás közben leülepedett szemcséket összerázással egynemű szuszpenzióvá kell tudni diszpergálni. A szem kezelésére szánt folyékony készítményekre az I. mikrobiológiai tisztasági osztályba sorolt gyógyszerkészítményekre előírtak vonatkoznak. A saját savó cseppek hatékonysága korábbi tanulmányok szerint nagymértékben függ az alkalmazott koncentrációtól. Geerling és munkatársai 2001-ben in vitro modellen (sejtkultúra) igazolták, hogy az 50- 100% koncentrációjú AS alkalma zása a HCEC-re toxikus hatású (15). Néhány évvel később Liu vrzsgálatai azt mutatták, hogy 100%-os AS alkalmazása az epithelsejt-migrációt jobban támogatja, mint a 25%-os AS (16). Egy későbbi tanulmányban ugyanez a munkacsoport a 12%-ot AS-koncentrációt határozta meg, az epithelsejtek növekedését leginkább támogató koncentrációként (17). Ezzel szemben Akyol-Salman leírása szerint a 100%-os AS használata a szaruhártya sebgyógyulását a 20%-os AS- hoz képest szignifikánsan gyorsítja (18). Napjainkban világszerte a leggyakrabban a 20%-os AS-koncentráció kerül alkalmazásra (19-23), ugyanakkor az egyes országok ajánlásai különböznek és a különféle intézetek 20%-100%-os AS-koncentráció klinikai használatát javasolják (24). Arról sem szabad megfeledkeznünk, hogy az AS-szemcseppek hatása a szemfelszíni betegség súlyosságától és a könnyfilm összetételétől is függ és egyénenként változik. Ezen hatások igazolására további vizsgálatok szükségesek. Mivel a különféle növekedési faktorok (EGF, KGF, HGF, FGFb, TGF-ß)
