Szemészet, 2013 (150. évfolyam, 1-4. szám)
2013-03-01 / 1. szám
í / к Мл V ■ á-ё # Ш 1 New experimental method to study lacrimal gland ductal epithelia 1 . ábra: Izolált, 24 órán át tenyésztett könnymirigy ductus elektronmikroszkópos képe. A: Ductus keresztmetszeti képe. B: Luminális oldal képe A képeken alkalmazott jelölések: LM: luminális membrán: BM: basolateralis membrán; MK: mitokondrium; MV: mikrovillus; SG: szekretoros granulum HEPES-oldatba (pH 7,4) helyeztük. A nyugalmi pHi meghatározásához a klasszikus lineáris modellt használtuk (6). A vizsgált öt ductus öszszesen 22 régiójának (VT) pH-ja 7,4±0,01-nek bizonyult. A mért pH-értékek stabilitása azt támasztotta alá, hogy a kísérleti rendszerben a pH a vizsgálatok során konstans szinten tartható. Na+/H+-csere (NHE) A következőkben a könnymirigy ductus izolátumok funkcionális vizsgálatok kivitelezésére való alkalmasságát tanulmányoztuk. Először a Na+/H+-transzport proteinek - amelyek feladata az elektroneutrális Na+-proton csere - működését vizsgáltuk (10, 11). A standard HEPES-oldatból történő Na+eltávolítás rapid és jelentős intracelluláris acidózist eredményezett (0,2 ± 0,01 pH U/perc, n=3 ductus/15 VT), míg a Naprendszerbe adása a pH kiindulási szintre történő beállását eredményezte (2. ábra) . Tekintettel arra, hogy a kísérlet során használt oldat nem tartalmazott HCOy-iont, eredményeink a könnymirigy ductus sejtek basolateralis oldalán működő Na+-függó proton efflux mechanizmus létezését bizonyítják. A HC03VC02-tartalmú oldatból történő Na+-eltávolítás szintén jelentős acidózist hozott létre (0,22±0,04 pH U/perc, n=3 ductus/15 VT), bizonyítva, hogy a Na+-függó H+-efflux mechanizmus HC03 -független folyamat (3. ábra). Na+/HC03“-kotranszporter (NBC) Megvizsgáltuk, hogy a könnymirigy ductus sejtek basolateralis membránjában működik-e funkcionálisan aktív Na+-függő HC03~transzporter. A basolateralis HC03VC02 expozíció gyors és nagymértékű intracelluláris acidózist okozott (3. ábra), amely a C02 citoplazmába történő gyors diffúziójával magyarázható. Az acidózis utáni pHi viszszaállás csak kismértékű volt (0,04±0,02 pH U/perc, n = 6 ductus/16 VT), ami a könnymirigy ductus sejtekbe történő HC03-flux mechanizmus alárendelt szerepét sejteti. 2. ábra: A Na+/H+-cserélő [NHE] aktivitásának vizsgálata. A perfundáló oldatból történő Na+-eltávolítás gyors, reverzibilis acidózist hozott létre 3. ábra: A Na+/HC03~-kotranszporter aktivitásának vizsgálata. A HC03_/COs_-oldattal történő perfúzió gyors acidózist eredményezett a COs~-sejtbe történő rapid diffúziója miatt. A HC03“/C02 -oldatból történő Na+-eltávolítás a pH további csökkenését okozta
