Szemészet, 2004 (141. évfolyam, 1-4. szám)
2004-09-01 / 3. szám
306 Szemészet I# 8196 CONTROL 1. ábra. Nem kezelt (kontroll) állat corneája közepének elektronmikroszkópos képe 2. ábra. 0,9%-os izotóniás NaCl-oldattal kezelt cornea felszíne Anyag és módszer 1. Egy törzsből származó, azonos életkorú, oltott, pigmentált házinyulakat használtunk a kísérlethez, átlagosan 1 kg testsúlyban. A hármas csoportok egyik szemébe az egyik oldatot cseppentettük naponta kétszer, 3 hónapon át (pl. 2. anyag), a másik szembe a másik oldatot (pl. 3. anyag), tehát azonos kezelésben 3 szem részesült (1. táblázat). Három nyúl 6 szeme szolgált kontrollként. Összesen 15 házinyulat fogtunk be a kísérletbe. Mindegyik oldat pH-ját 7-re állítottuk be néhány csepp nátrium-karbonát hozzáadásával. Az oldatokat sterilizálás után jégszekrényben, +4 °C-on tároltuk. A pH-t a kísérlet végén is meghatároztuk, nem különbözött a kezdeti értéktől. Az állatokat túlaltatással - Dormicum (midazolam), Egis, 5 mg/ml inj. és Midarine (saxamethonicum chloride inj. Br, Glaxo-Smith-Kline) adásával - öltük meg. 2. A kísérleti állatok corneájára eltávolítás előtt 4%-os glutáraldehidet cseppentettünk a struktúra minél jobb megőrzése érdekében. A szemgolyó kivétele után a corneát eltávolítottuk.- Fixálás: 4%-os glutáraldehidben 2 órán keresztül, 4 °C- on. (A fixáló receptje: 0,1 M Na-cacodylate puffer, 25%-os glutáraldehid, 84 ml 0,1 M Na-cacodylate, 16 ml 25%-os glutáraldehid.) - Mosás: 0,1 M Na-cacodylate pufferben 3x10 percig. - Utófixálás: 1%-os Osö4 fixálóban 1 órát (5%-os Osö4 törzsoldatból 0,1 M Na-cacodylate pufferrel hígítva 1%ra).- Mosás: 0,1 M Na-cacodylate pufferban 3x10 perc. - Dehidrálás: 20%-os aceton 10 perc, 40%-os aceton 10 perc, 50%-os aceton 10 perc, 70%-os aceton 10 perc, 90%os aceton 3x10 perc, 96%-os aceton 3x10 perc, absz. aceton 3x10 perc, xilol akár 1 napig is. A xilol leöntése után exszikkátorban szárítottuk a szövetdarabokat. A preparátum felragasztása Al-tönköcskére Silver Print ragasztóval (GC Electronics) történt. Ezután a felületet szeneztük, majd aranyoztuk. A vizsgálat Zeiss DSM 940 scanning elektronmikroszkóppal történt. A képek 20 KeV feszültségen 1000-szeres nagyítással készültek. A képeket digitalizáltuk, majd Scion Image programmal az egyes sejteket körberajzolva mértük a sejt vetületi fel-1. táblázat. A vizsgálatok eredményei Kísérleti összetétel Terület (pm2)* Sérült sejtek (%) X2-próba eredménye a kontrolihoz viszonyítva 1. Nem kezelt 590±16 16 2. 0,9% sóoldat (izotóniás) 542±10 28 p>0,01 3. 0,01% benzalkonium-klorid izotóniás sóoldatban 538±10 29 p>0,01 4. 0,01% centrimonium-bromid izotóniás sóoldatban 591±16 27 p>0,01 5. 0,1% etiléndiamin-tetraacetát (EDTA) izotóniás sóoldatban 531±21 15 p>0,5 6. 2,5% (izotóniás) glicerin 605±14 17 p>0,5 7. 3-as anyag izotóniás glicerinben 699±18 14 p>0,5 8. 4-es anyag izotóniás glicerinben 625±16 19 p>0,2 9. 5-ös anyag izotóniás glicerinben 616±19 17 p>0,5 *: A t-próba (p<0,05) azt mutatja, hogy a.) a 2. különbözik az 1.-től, b.) a 6. különbözik a 2.-tól (de nem az 1.-től), c.) a 7. különbözik a 3.-tól, d.) a 9-es különbözik az 5.-től Follmann Piroska
