Szemészet, 1963 (100. évfolyam, 1-4. szám)
1963-03-01 / 1. szám
1 Vizsgálataink során a fenti kérdésre a Coons és Kaplan által 1950-ben leírt fluorescens módszerrel próbáltunk feleletet kapni. E módszer lényege az, hogy fluorochrommal conjugált immunsavót homolog antigénnel összehozva stabil fizikokémiai kapcsolat jön létre az antigén és a festett ellenanyag között, melyet nem lehet lemosni az antigénről. Az így festett antigének fluorescens mikroszkópban intenzíven csillognak. Heterolog antigén esetén ilyen kapcsolat nem jön létre, a festett immunsavó lemosható és az antigén fluoreszkálása elmarad. Ez a festési módszer lehet direkt vagy indirekt. Direkt festés esetén a fluorochrommal conjugált immunsavót közvetlenül hozzuk össze a kérdéses antigénnel. Indirekt festés alkalmával az antigént nem festett immunsavóval kezeljük. Ekkor a savó ellenanyagtartalmú globulin fractiója az antigénhez kötődik. Ezután, amennyiben humán savót használtunk, fluorochromisált humán antiglobulint viszünk a kenetre és az így létrejövő globulin-antiglobulin kapcsolat révén festjük meg az antigént is. 3. ábra 4. ábra Ezeket a módszereket eddig csak Kaufmann (1960), majd Witmer (1961) használták szemészeti vonatkozásban víruskimutatásra, mindketten a herpes simplex vírusát mutatták ki így a cornea hámsejtjeiben. Specifikus immunsavó hiányában keratoconjunctivitis epidemicában 6—8 hete megbetegedettek reconvalescens savóját használtuk. A direkt festés számára a savót Lissamine—Rhodamin B200-as fluorochrommal eonjugáltuk Chadwick (1958) módszere szerint, az indirekt festés számára a humán antiglobulint fluoresceinisotliiocyanattal conjugáltuk Riggs (1958) leírása szerint. A conjugált reconvalescens savó globulin fractióját félig telített ammonium sulfáttal csaptuk ki és 4 napon keresztül +4 C°-on dialysáltuk (Geck és Szántó, 1961). A kaparékokat az alsó áthajlásról és a plica tájékáról vettük. A keneteket száradásuk után metilalkohollal fixáltuk. Minden beteg kötőhártyájáról 2 kaparékot vettünk. Az egyiket Giemsával, a másikat a fluorescens módszerrel festettük meg. Direkt festéskor a Rhodaminnal conjugált savót a fixált kenetre csepegtettük és 20 percig állni hagytuk nedves kamrában, majd 2 percig mostuk folyó csap vízzel és megszárítottuk. Indirekt festés alkalmával 26
