203982. lajstromszámú szabadalom • Eljárás újszülött borjak Rotavírus és Escherichia coli mikroorganizmusok okozta hasmenéses megbetegedése elleni inaktivált, adjuvált, bivalens oltóanyag előállítására
1 HU 203 982 B 2 A találmány tárgya eljárás újszülött borjak Rotavirus és Escherinchia coli mikroorganizmusok okozta hasmenéses megbetegedése elleni adjuvált, inaktivált, bivalens oltóanyag előállítására és az oltóanyag. A nagyüzemi szarvasmarha-tenyésztésben jelentős veszteségeket okoz a boijak újszülött korában járványos jelleggel jelentkező hasmenés, amely az esetek túlnyomó többségében komplex kóroktani megbetegedés és amelyet leggyakrabban a rotavirus és az enteropathogén Escherichia coli baktériumok együttesen okoznak [Magyar Állatorvosok Lapja, 4, 208-11 (1977)]. Irodalmi adatok vannak arra, hogy rotavírusfertőzést egyéb állatfajok újszülött egyedeiben is kimutattak [Acta Microbiol. Acad. Sei. Hung. 26, 255 (1979)]. Hazánkban rotavírusok jelenlétét és kóroktani szerepét először 1976-ban járványtani megfigyelésekkel, kísérleti állatfertőzéssel, a béltartalom elektronmikroszkópos, a bélhámsejtek immunfluoreszcenciás vizsgálatával bizonyították. Sejttenyészetben passzálható citopatogén rotavirus törzset 1977-ben sikerült izolálni [Magyar Állatorvosok Lapja, 34, 450 (1979); Acta Microbiol. Acad. Sei. Hung. 26, 255 (1979); Zycie Wetrynaryjne NR, 11, 328 (1979); Bull. Off. Int. Epiz. 1979. Proc. Ink Congr.]. Humán patogén rotavímsokat is leírtak, elkülönítettek és in vitro sikeresen tenyésztettek [Science, 207, 189-91,(1980)]. A humán rotavímsokkal szemben eredményes immunizálási kísérleteket végeztek csecsemőkön és fiatal gyermekeken [Reviews of Infections Disease, 2(3), 459-69 (1980)]. A fertőzés létrejöttében nem elhanyagolható az egyéb enteropathogén mikroorganizmusok - Coronavirus, Cryptosporidium - szerepe sem. A nagyüzemi borjúnevelés feltételei között a járványok elején a borjak morbiditása 100%-os, a mortalitás elérheti a 40%-ot is. Az újszülött boijak bélcsatomájában a körfolyamatokat általában a rotavirus indítja meg. Vizsgálataink szerint a kórfejlődés vírusos szakasza 8-10 óra alatt lezajlik, azonban a bélbolyhok hámsejtjei oly mértékben károsodnak, hogy a gyors reparáció ellenére fokozott a lehetőség az enteropathogén E. coli baktériumok által okozott szövődmények, súlyos és elhúzódó hasmenéses megbetegedések kialakulására. A szakember által ismert, hogy enteropathogén, elsősorban K99+ E. coli baktériumtörzsek önállóan is okozói lehetnek az újszülött borjak járványos hasmenéses megbetegedésének. A betegség megelőzésére az ST+ K99 antigénszerkezetű E. coli törzs felhasználásával állítottak elő oltóanyagot. Az oltóanyag előállításához baktérium szuszpenziót képeztek egy foszfát, pepton, élesztőkivonat, glükóz és nyomelem összetevőket tartalmazó táptalajon. Az ebből előállított oltóanyag az egész baktériumtesteket tartalmazza. Ilyen készítmény a magyar gyártmányú „Phylacol K99" (Phyiaxia Oltóanyagtermelő Vállalat). A 167 630. sz. magyar szabadalmi leírás sertések és borjak enterális coli megbetegedései elleni vakcina és szémm előállítását ismerteti. Az eljárás szerint enterotoxint termelő E. coli törzsből húslevestenyészetet készítenek, a tenyészettel peptont, agart, szénhidrátot és marhahúskivonatot tartalmazó táptalajt oltanak be, ezt 24 órán át 37 °C hőmérsékleten tenyésztik, ezután homogenizálják és inaktiválószerrel kezelik. A műszaki megoldás inaktiválószerként formaldehidoldatot javasol. Az eljárással olyan vakcinát és szérumot állítottak elő, amely megfelelő mennyiségű enterotoxint tartalmaz. Mindkét készítmény alkalmas area, hogy az újszülött borjak E. coli baktériumok okozta hasmenéses járványát megelőzzék, de nem fejtik ki hatásukat a rotavírusok okozta fertőzésekkel szemben, sőt, mivel mindkét készítmény a baktériumok teljes testét tartalmazza, azon olyan árnyékoló hatást váltanak ki, amely hatástalanná teszi egy esetlegesen rotavírus-fertőzés elleni oltóanyag kombinációjának alkalmazását [Arch. Exper. Vet. Med. 41, 908-13 (1987)]. A 4 341 763. sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint rotavírusok okozta fertőzés megakadályozására alkalmas oltóanyagot állítottak elő embergyógyászati célokra. Az eljáráshoz a párizsi Pasteur Intézetnél lévő Nemzeti Mikroorganizmus Tenyészetek Gyűjteményében letétbe helyezett bovin rotavirus törzset használták fel. Ennek tenyésztését borjúvese sejtvonalon végezték és monovalens, kizárólag rotavirus okozta járvány megelőzésére alkalmas készítményhez jutottak. Ugyancsak humán célokra állítottak elő rotavirus infekció megelőzésére oltóanyagot a 4 341 870. sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint. Az eljárásban humán rotavímst tenyésztettek majomvese sejtvonalon és többszöri, sertéseken történő átoltás, tripszines kezelés és ülepítőcentrifugán való elkülönítés után monovalens oltóanyagot kaptak. Az utóbbi két eljárás szerint előállított oltóanyag humán célra készült, de alkalmas állatgyógyászati célokra is. Állatgyógyászati alkalmazásuk esetén kizárólag a rotavírusok okozta járvány megelőzését célozzák és velük nem védhető ki az ugyanakkor fellépő E. coli okozta infekció. Célul tűztük ki olyan bivalens oltóanyag előállítását, amelynek egyszerű alkalmazása lehetővé teszi az újszülött borjak Bovin Rotavirus és Escherichia coli mikroorganizmusok okozta hasmenéses járványának megelőzését. A találmány alapja az a meglepő felismerés, hogy az ST+ K99 antigén szerkezetű E. coli törzsből előállított oltóanyag csak úgy tudja megfelelő módon kiváltani hatását egy általunk első ízben izolált rotavirus törzsből készített oltóanyag jelenlétében, ha a készítmény előállítása során a baktériumtest felületéről mechanikusan leválasztjuk a pilusokat, majd a rendszerből eltávolítjuk a pilusmentesített baktériumtesteket, amelyek a vínisantigénrc nézve árnyékoló hatást fejtenek ki. Az így elkészített pilusantigént megfelelő arányban elegyítjük a hasmenéses tünetek között megbetegedett borjakból izolált H. C. S. jelű vírustörzsből előállított vírusantigénnel. A találmány szerinti eljárás és készítmény is új. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
