203981. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sebgyógyulást elősegítő készítmények előállítására
1 HU 203 981 B 2 rés teljesen új, az irodalmi ismertetéseknek ellentmondó. Az ismert fiziológiai regulátor hatásából (Oehme, Löwe, Göres: Beitrage zur Wirkstoff-forschung (12. füzet) Akademie-Industrie-Komplex „Arzneimittelforschung, 1136 Berlin, Alfred Kowalke Str. 4) a találmány szerinti eljárással előállított készítmények sebgyógyulást elősegítő hatására nem lehetett következtetni. A regulátor hatást mutató peptidekre jellemző, hogy a parciális szekvenciákban egészen eltérő biológiai hatások is rejtve lehetnek; ezeknek a rejtve lévő hatásoknak a kiemelése és felerősítése (például derivátok képzése révén) a faimakológiai kutatás fontos feladata. A már ismert emlékezeterősítő hatás, eredményes stresszkezelés, vérnyomáscsökkentő hatás alapján nem volt várható a sebgyógyulást elősegítő hatás. A fent említett irodalmi helyen a szívre és vérkeringésre, továbbá a gasztrointesztinális traktusra kifejtett kedvező hatásról történik említés. A sebgyógyulás ezen effektusoktól alapvetően eltér, ezekből a sebgyógyulásra nem lehet következtetni. A találmány célja az, hogy olyan készítményeket biztosítson, amelyek közvetlen vagy közvetett alkalmazás útján a seb területén a gyógyulási folyamat első lépését, azaz a saijszövet képződését serkentik és gyorsítják, hatóanyagtartalmuk szempontjából kémiailag egyértelműen definiálhatók, jól elviselhetők, kívánt esetben hatásukat alátámasztó, biológiai hatékonysággal bíró ismert hatóanyagokkal kombinálhatók, és a formulázáshoz szükséges, gyógyászati szempontból alkalmas vivőanyagokat tartalmaznak, aminek következtében az emberen való alkalmazása lehetővé válik, és amely készítmények az eddig ismert lehetőségeken túlmenően a sebgyógyulást, elsősorban a sarjszövet képződését kedvezően befolyásolják, és ezáltal a seb gyógyulási folyamatát egészében elősegítik. A találmány feladata olyan, a sebgyógyulást elősegítő hatású készítmények előállítási eljárásának a kidolgozása, amelyek a sebgyógyulás alapvető folyamatát, azaz a sarjszövet képződését serkentik. Erre a célra biológiailag hatékony peptideket választás szerint vagy a célhoz kötötten meghatározott hatású, már ismert anyagokkal - például antibiotikumokkal vagy szulfonamidokkal - kiegészítve kémiailag közömbös, a gyógyszerkészítésben szokásos oldószerekkel és vivőanyagokkal olyan formába hozunk, amely lehetővé teszi a seb területén a közvetlen vagy közvetett, lokális alkalmazást Ezt a feladatot úgy oldottuk meg, hogy a H-Lys-Pro- OH pepiidet, amely részszekvenciája többek között a fiziológiai regulátor ,JP” pepiidnek [P. Oehme és munkatársai: Substanz P; a következő helyen: Oehme, Löwe, Göres: Beiträge zur Wirkstoff-forschung (12. füzet), Akademie-Industrie-Komplex „Arzneimittel-forschung”, 1136 Berlin, Alfred-Kowalke-Str. 4), H-Lys- Pro-OH-származékokat - például H-Lys-Pro-OH sókat, védőcsoportot tartalmazó H-Lys-Pro-OH-származékokat -, valamint a Lys-Pro szekvenciát tartalmazó egyes lineáris vagy ciklusos peptideket minőségileg új, azaz a sarjszövet képződését serkentő hatás hordozójaként alkalmaztunk. E célra alkalmazható egyik előnyös vegyidet az N(4-nitro-benzil-oxi-karbonil)-lizil-prolin-hidroklorid. Ezt úgy állítjuk elő, hogy egy (I) általános képletű lizinszármazékot egy (II) általános képletű prolinszármazékkal - ahol az (I) általános képletben X jelentése tercier-butoxi-karbonil-, 4-metoxi-benziloxi-karbonil-, bifenil-izopropil-oxi-karbonil-, a,ctdimetil-3,5-dimetoxi-benzil-oxi-karbonil-, 2-nitrofenil-szulfenil- vagy 9-fluorenil-metoxi-karbonilcsoport; Y jelentése hidroxil-, pentafluor-fenil-, pentaklór-fenil-, triklór-fenil-, 4-nitro-fenil-, N-hidroxi-szukcinimid-észter- vagy hidrazincsoport; és a (II) általános képletben A hidroxil-, metil-, etil-, tercier-butil-, fend- vagy fenacil-észter-csoportot jelent - a peptidkémia területén szokásos kapcsolási módszerek alkalmazásával [E. Wünsch: Synthese von Peptiden; a következő helyen: Houben Weyl 15/11 kötet, Methoden der organischen Chemie, szerk. E. Müller, Georg Thieme (kiadó) Stuttgart 1974] N,N’-diciklohexil-karbodiimid vagy NJ4’-diciklohexil-karbodiimid/segédanyag (előnyösen 1-hidroxi-benzotriazol) vagy vegyes anhidrid, aktív észter vagy azid segítségével kondenzáljuk, és az így kapott dipeptidszármazék kristályosítással vagy adszorpciós kromatográfiával való tisztítása után az amino- és karboxilcsoport védőcsoportját a peptidkémia területén ismert lehasítási eljárások (lásd E. Wünsch fentebb idézett helyen), elsősorban sósavval dioxánban vagy jégecetben vagy trifluor-ecetsavval cink/ecetsav segítségével, piperidinnel vagy alkalikus hidrolízissel eltávolítjuk, és az így kapott H-Lys-[Z(N02)]-Pro-OH dipeptidet előnyösen hidroklorid alakjában elkülönítjük. A peptidkapcsolást előnyösen aktív észter segítségével végezzük úgy, hogy az N-(tercier-butoxi-karbonil)N-(4-nitro-benzil-oxi-karbonil)-lizin-(pentafluor-fenil)észtert prolinnal egy mól trietil-amin jelenlétében 10:1 arányú dimetil-formamid víz elegyben reagáltatjuk. A reakcióelegyet egy órán át 0 °C hőmérsékleten, majd 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük, utána kálium-hidrogén-szulfát oldatba öntjük, és a nyersterméket etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves kivonatot előtt kálium-hidrogén-szulfát oldattal, majd vízzel mossuk, és vízmentes nátrium-szulfáton megszárítjuk. Az etil-acetát vákuumban való lepárlása után a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat alapján egységes terméket az N-(tencier-butoxi-karbonil)-védőcsoport eltávolítása céljából 40 percen át 4,2 n sósavval kezeljük dioxános oldatban, és az így kapott HLys[Z(N02)]-Pro-OH dipeptidet (Rf értéke n-butanol, jégecet és víz 4:1:1 arányú elegyében kifejlesztve 3,9; n-butanol, jégecet, víz, etil-acetát 1:1:1:1 arányú elegyében 5,6; Kieselgel készlemezeken (Kavalier-Csehszlovákia) hidrokloridja alakjában vizsgáljuk és értékeljük: [a]§ = -35,8° (c = 1, vízben). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
