203790. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dipeptidek előállítására enzimatikus úton

1

HU 203 790 B

2

7. példa

DJ-,-Dipeptidamidok karboxipeptidáz Y katalizálta szintézise D-tirozin vagy D-fenilalanin-etil-észter szubsztrátkomponenssel és L-aminosavamid nukleofilkomponensekkel, vízben Enzim: 15 prnól/1 EDTA: 1 mmól/1-komponensekből, amelyek nukleofil-komponensként is szerepelnek, vízben, pH 9,0 értéken Enzim: 15 pmól/1 EDTA: 1 mmól/1

D-szubsztrát Konc. Termék Hozam

(mól/1) (%)

Szubsztrát10

Nukleofil Konc. (mól/1)

PH

Termék Hozam (%)

10

tyr-OEt

leucinamid

0,2

9,0

tyr-Leu-NH2

82

tyr-Leu-OH

2

tyr-OEt

valinamid

0,3

9,0

tyr-Val-NH2

94

15

tyr-OEt

argininamid

0,2

9,0

tyr-Arg-NH2

86

phe-OEt

alaninamid

0,8

9,0

phe-Ala-NH2* b)

50

0 koncentráció: 50 mmól/1

b) kismértékű polimerizációt is észleltünk 20

8. példa

D,D-Homodipeptid-észterek karboxipeptidáz Y katalizálta szintézise D-aminosav-észter szubsztrát

tirozin-etil-észter

0,05

tyr-tyr-OEt

9

fenilalanin-etil-észter

0,1

phe-phe-OEt

10

tirozon-etilénglikol-észter

0,05

tyr-tyr-OEt-OH

1

metionin-metil-észter

0,1

met-met-OMe

3

9. példa

Oldalláncban védett, karkboxil-terminális aminosavakat tartalmazó LJ^-dipeptidek karboxipeptidáz Y katalizálta szintézise L-Tyr-OEt szubsztrát-komponenssel és oldalláncban védett L-aminosavakkal és -amidokkal, mint nukleofil komponensekkel Enzim: 10 pmól/1 EDTA: 1 mmól/1 Szubsztrát: 50 mmól/1

Nukleofil

Konc.

(mól/1)

PH

Oldószer

Termék

Hozam

(%)

acetamido-metil-cisztein

1

8,5

víz

Tyr-Cys(S-Acm)OH

10

acetamido-metil-ciszte inamid

0,4

8,5

vízTyr-Tyr-Cys(S-Acm)NH2

Tyr-Cys(S-Acm)OH

12

1

ß-benzil-aszparaginsav

0,1°

9,0

30% DMSO

Tr- Asp(OBzl)OH

13

e-(trifluor-acetil)-lizin

0,1°

8,5

30% DMSO

Tyr-Lys(Tfa)OH

12

y-(terc-butil)glutaminsavamid

0,1°

8,0

30% DMSO

Tyr- Glu(OtBu)NH2

3

7-metil-glutaminsav

0,3

8,5

víz

Tyr-Glu(OMe)OH

20

y-etil-glutaminsav

0,3

8,5

víz

Tyr-Glu(OEt)OH

18

a) 25 mmól/1 szubsztrát, 20 jimól

10. példa 45 láncban védett L-aminosav vagy -amid nukleofil-Oldalláncban védett, C-terminális aminosavakat komponensből

tartalmazó DJL-dipeptidek karboxipeptidáz Y katali- Enzim: 10 |imól/l,

zálta szintézise D-Tyr-OEt szubsztrátból és oldal- EDTA: 1 mmól/1,

Szubsztrát: 50 mmól/1

Nukleofil

Konc.

(mól/1)

PH

Oldószer

Termék

Hozam

(%)

acetamido-metil-cisztein

1

8,5

víz

tyr-Cys-(S-ACm)OH

75

acetamido-metil-ciszte inamid

0,4

8,5

víz

tyr-Cys(S-Acm)NH2

tyr-Cys(S-Acm)OH

71

6

ß-benzil-aszparaginsav

0,1°

9,0

30% DMSO

tyr-Asp(OBzl)OH

54

8