203787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-keto-L-gulonsav előállítására
1 HU 203 787 B 2 A lombikot 1,25 ml fentiekben elkészített második oltótenyészettel beoltjuk és rázással tenyésztjük 30 *C- on 2 napon keresztül. Az így kapott fermentációs oldat a nagy teljesítményű folyadékkromatográfiás vizsgálat alapján 86,4 mg/ml 2-keto-L-gulonsavat tartalmaz (kitermelés: 84,4%). Ha ugyanilyen módon elvégezzük a tenyésztést azzal a különbséggel, hogy cérium-kloridot nem adagolunk a táptalajhoz, akkor a fermetnációs oldat 51,0 mg/ml 2- -keto-L-gulonsavat tartalmaz (kitermelés: 49,8%). 2. példa Pseudogluconobacter saccharoketogenes 12-4 (IFO 14 483, FERM BP- 1131), 12-5 (IFO 14 465, FERM BP-1129), 12-15 (IFO 14 482, FERM BP-1132) és 22-3 (IFO 14 484, FERM BP-1133) törzseket ugyanolyan módon tenyésztünk, mint ahogyan azt az 1. példában leírtuk és így második oltótenyészetet állítunk elő. 25 ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 04% szárított élesztő, 0,3% ammóniumszulfát, 0,05% Na2S203»5H20, 0,01% FeS04*7H20, 0,05% Cej(C03)3*8H20, 34% CaC03 (Akadama) és 94% külön sterilizált L-szorbóz, egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és 120 *C-on 20 percig autoklávban kezeljük. 1,25 ml-t a fentebb említett oltótenyészetekból a fermentációs táptalajt tartalmazó Erlenmeyer-lombikba helyezünk és rázással 30 *C-on 3 napon keresztül tenyésztjük. Az így kapott fermentációs oldatot nagy teljesítményű folyadékkromtográfíával határozzuk meg. Az eredményeket a 2. táblázatban tüntetjük fel. Megadjuk a keletkezett 2-keto-L-gulonsav mennyiségét (mg/ml-ben), valamint a Ce2(C03)3*8H20 nélküli táptalajban végzett tenyésztéssel kapott 2-keto-L-gulonsav mennyiségét 2. táblázat Törzs Cérium-karbonát nélkül hozzáadott 12-4 51,0 (49,8%) 63,0(614%) 12-5 75,9 (74,1%) 87,6 (85,6%) 12-15 45,2 (44,1%) 67,3 (65,7%) 22-3 69,8 (68,1%) 88,1 (86,1%) A zárójelben feltüntetett számok kitermelést jelentenek. 3. példa Pseudogluconobacter saccharoketogenes TH14-86 (IFO 14 466, FERM BP-1128)-t tenyésztünk ugyanolyan módon, mint az 1. példában és így egy második oltótenyészetet nyerünk. 25 ml fermentációs közeget, amelynek összetétele 2,0% CSL, 04% szárított élesztő, 0,3% ammónium-szulfát, 0,05% Na2S203*5H20,0,1% FeS04«7H20, 5% Ca -CO3 (Akadama) és 104% külön sterilizált L-szorbóz, egy 200 ml-es Erlenmeyer-lombikba helyezünk és 120*C-on 20 percig autoklávban kezeljük. 1,25 ml-t a fent említett oltótenyésztből az Erlenmeyer-lombikba teszünk, amely a fermentációs közeget tartalmazza és ezt rázással 30 *C-on 2 napig tenyésztjük. Ugyanilyen körülmények között 30 *C-on 2 napon keresztül rázással végezzük a tenyészetet, úgy, hogy a táptalajhoz a következő adalékokat adjuk: 0,01% ittrium-klorid, ugyanennyi lantán-klorid, cérium-klorid, neodímium-klorid, szamárium-klorid, europium-klorid, gadolínium-klorid, terbiumklorid, diszprózium-klorid, holmium-klorid, erbium-klorid, és ittrium-klorid, vagy ugyanennyi prazeodíniumoxid vagy 0,05% szkandium-oxid. Az így kapott fermentációs oldatot nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával vizsgáljuk. A kapott 2-keto-L-gulonsav mennyiségét (mg/ml táptalaj) a 3. táblázatban tüntetjük fel. 3. táblázat Ritkaföldfém Keletkezett 2-keto-L-gulonsav nélkül 78,5 (69,4%) YC13*6H20 86,9 (76,8%) LaCl3*7H20 97,6 (86,3%) CeCl3«7H20 97,6 (86,3%) NdCl3*6H20 90,1 (79,6%) SmCfe^őHA 84,1 (74,3%) EuCl3»6H20 83,0 (73,4%) GdCI3*6H20 81,9 (72,4%) TbCl3*nH20 82,0 (724%) DyCl3»6H20 82,1 (72,6%) HoCl3»6H20 81,9 (72,4%) ErCl3*6H20 82,2 (72,6%) YbCl3*6H20 82,2 (72,6%) Pr«On 94,6 (83,6%) Sc203 80,6 (71,2%). A zárójelben feltüntetett adatok kitermelést jelentenek. 4. példa Az 1. példában leírtákkal megegyező módon Pseudoglukonobacter saccharoketogenes TH 14-86 törzset tenyésztünk az 1. példában leírt fermentációs közeg alkalmazásával, amelyhez a 4. táblázatban feltüntetett mennyiségben lantán-oxidot, lantán-kloridot, lantánkarbonátot, lantán-nitrátot, lantán-oxalátot, cériumoxidot, cérium-kloridot, cérium-szulfátot vagy cériumkarbonátot adunk. Ebben az esetben a tenyésztési periódus 30 óra. A fermentációs oldatban keletkezett 2- -keto-L-gulonsav mennyiségét (mg/ml) nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával határozzuk meg. Az eredményeket a 4. táblázatban tüntetjük fel. 4. táblázat Ritkaföldfém Hozzáadott (%) Keletkezett 2-keto-L-gulonsav nélkül 0 60,8 (59,4%) LaCl3*7H20 0,002 74,3 (72,6%) La2(C03)3 0,002 74,0 (72,3%) La(N03)j*6H20 0,002 73,6 (71,9%) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
