203784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás eglin és eglinszármazékok, és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint tesztkit eglin meghatározására
1 HU 203 784 B 2 tében (X) általános képletű vegyületté oxidáljuk (3. reakcióvázlat). A trinukleotidok találmány szerinti előállításához a (X) általános képletű dinukleotidokról - a képletben R1, R2 és R3 jeíentése a fenti és B1 és B2 jelentése egymástól függetlenül timil-, citozil-, adenil- vagy guanilcsoport - az R'-védŐcsoportot lehasítjuk és a kapott vegyületet (VHI) általános képlett! vegyülettel reagáltatjuk, adott esetben vízelvonó szer és bázis jelenlétében, vagy egy (VHIA) általános képletül vegyülettel reagáltatjuk és ezt követőén oxidáljuk, mimellett (XI) általános képle tű vegyület képződik (4. reakcióvázlat). Az R'-védőcsoport lehasítását és a (XI) általános képletű trinukleotidokká kondenzáltatást a (X) általános képletű dinukleotidok előállításánál leírt módon végezzük. A tetranukleotidok találmány szerinti előállításához a (XI) általános képletű trinukleotidokat a (X) általános képletű dinukleotidokra fent leírt módon reagáltatjuk. A találmány egyik előnyös kiviteli formájában R1- védőcsoportként 4-metoxi-tritil-csoportot, R2-védőcsoportként klórral szubsztituált fenilcsoportot, különösen 2-klór-fenil-csoportot, és R3-védőcsoportként 2-cianoetil-csoportot alkalmazunk. A (VII) általános képletű vegyületben az X1- és X2-csoport előnyös jelentése 1-benztriazolil- oxi-csoporL A (XI) általános képletű trinukleotidokat előnyösen oly módon állítjuk elő, hogy a (X) általános képletű dinukleotidokban az R‘-védőcsoportot lehasítjuk és a kapott vegyületet (VHI) általános képletű vegyülettel - a képletben X2 jelentése hidroxicsoport vagy abból levezetett csoport - reagáltatjuk vízelvonó szer jelenlétében (4. reakcióvázlat). A találmány szerinti vízelvonó szer például a 2,4,6- trimetil- vagy triizopropil-benzoszulfonil-klorid, -imidazolid, -tetrazolid vagy -1,2,4-triazolid, amely adott esetben nitrocsoporttal szubsztituált lehet Előnyös vízelvonó szer a (XII) képletű 2,4,6-trimetil-benzolszulfonil-3-nitro- 1,2,4-triazolid. Előnyösen olyan nukleozidokat alkalmazunk, amelyekben a bázisrészen található szabad aminocsoport védett. Előnyös védőcsoport adeninre a benzoilcsoport, citozinra a benzoil- vagy 4-metoxi-benzoil-csoport, guaninra az izobutiril- vagy difenil- acetil-csoport. A timint előnyösen védőcsoport nélkül alkalmazzuk. Az oligonukleotidok c) reakciólépésnek megfelelő találmány szerinti előállításában önmagában ismert félautomatikus vagy teljesen automatikus mikroproceszszoros oldószer- és reagensadagoló rendszerrel ellátott készüléket alkalmazunk. Az a) reakciólépés szerint előállított (VI) általános képletű vegyületben az R'-védőcsoportot a fent leírt módon lehasítjuk, majd vagy (VIII) általános képletű vegyülettel, vagy (VULA) általános képletű vegyülettel, vagy (X) vagy (XI) általános képletű vegyülettel, amelyben előzőleg az R3- védőcsoportot bázissal lehasítottuk (a 2-ciano-etil-csoport jelentésű R3-at például tri(rövidszénláncú alkil)-aminnal, pl. trietil-aminnal, a fenti inert oldószerek vagy oldószerelegyek egyikében 10-40 *C-on, különösen szobahőmérsékleten, adott esetben vízelvonó szer vagy bázis jelenlétében reagáltatjuk. A találmány azokra a reakciókra is vonatkozik, amelyekben (X) általános képletű dinukleotid vagy (XI) általános képletű trinukleotid helyett a b) reakciólépésben előállított tetranukleotidot alkalmazunk. Ha (VIIIA) általános képletű foszfitot alkalmazunk, akkor utána oxidálószerrel, például bázis jelenlétében jóddal való kezelés következik. Az ily módon előállított (Xm) általános képletű vegyülettel - a képletben R1 és R2 és B jelentése a fenti és n jelentése az 1-4 egész szám - annyiszor ismételjük meg a (VI) általános képletű vegyületre leírt reakciólépéseket (Rl lehasítása, a (VHI), (VHIA), (X), (XI) általános képletű vegyületekkel vagy megfelelő tetranukleotiddal való reagáltatás, adott esetben ezt követő oxidativ kezeléssel), amíg (XIII) általános képletű vegyület képződik, amelyben n jelentése kb. 19 és 69 közötti tetszés szerint választott szám. A találmány egyik előnyös kiviteli formájában R1- védócsoportként 4-metoxi-tritil-csoportot alkalmazunk és a cink-bromidos hasítást CH- vagy NH-sav jellegű vegyület, különösen 1,2,4-triazol vagy tetrazol jelenlétében végezzük. Például az 1,2,4-triazol alkalmazása a 4-metoxi-tritil-védőcsoport lehasítására új, és meglepő módon gyors, nagy hozam és mellékreakciók nélküli hasítást eredményez. Különösen előnyös a cink-bromid és az 1,2,4-triazol 20:1 és 100:1 közötti mólarányban való alkalmazása aprotonos oldószerből és alkoholból, például metilén-kloridből és 2-propanolból álló oldószerelegyben. A találmány egyik előnyös kiviteli formájában valamely (VI) vagy (Xm) általános képletű vegyületet, amelyben az R'-védőcsoportot lehasítottuk, (XI) általános képletű trinukleotiddal - amelyben az R3-védőcsoportot lehasítottuk - reagáltatunk vízelvonó szer, például 2,4,6-trimetil- vagy triizopropil-benzolszulfonilklorid, -imidazolid, -tetrazolid vagy -1,2,4-triazolid, amelyek adott esetben nitrocsoporttal szubsztituáltak, jelenlétében. Különösen előnyös a (XII) képletű 2,4,6- trimetil-benzolszulfonil-3 -nitro-1,2,4-triazolid. Az a különösen előnyös kombináció, amely szerint R1- védőcsoportként 4-metoxi-tritil-csoportot alkalmazunk, R‘-et 1,2,4-triazol jelenlétében cink-bromiddal hasítjuk le és a (XIII) általános képletű nem védett oligonukleotid-polisztirolgyanta (XI) általános képletű nem védett trinukleotiddal való reakciójához (XII) képletű triazolidot alkalmazunk vízelvonó szerként, lehetővé teszi, hogy meglepő módon kb. 40-70 bázishosszúságú nukleotidláncokat is rövid idő alatt, nagy kitermeléssel és nagy tisztaságban állítunk elő. Az oligodezoxinukleotidoknak a hordozóról való találmány szerinti lehasításához és a védőcsoportok d) reakciólépés szerinti eltávolításához önmagában ismert eljárásokat alkalmazunk. A hordozóról történő lehasításhoz és az előnyös 2-klór-fenil-védőcsoport eltávolításához különösen előnyösen alkalmazható reagens valamilyen arilaldoximát, például az 1,1,3,3-tetrametilguanidinum-2-nitro-benzaldoximát. A reakciót a fenti inert oldószerek egyikében, amelyhez előzőleg kevés vizet adunk, például 95%-os piridinben, szobahőmérsékleten végezzük. Utána ammónium-hidroxiddal rea-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 9
