203784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás eglin és eglinszármazékok, és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint tesztkit eglin meghatározására
1 HU 203 784 B 2 A találmány szerinti eljárás lehetővé teszi az eglint kódoló DNS-ek előállítását. Az a) lépésben nagyszámú szilárd hordozóanyag, így különböző téihálósodású és duzzadóképességű polisztirol, poliakrilamid, poliakrilamid-kopolimer, szervetlen anyagra, így kovaföldre, kovasavgélre vagy aloxra vitt poliamid vagy fiinkcionalizált szilán alkalmazható. A találmány egyik előnyös kiviteli formájában szilárd hordozóanyagként térhálósított polisztirolt alkalmazunk, amit egy „spacer”-en, így 1-5 poláros kétértékű funkciós csoporttal, például imino-, oxo-, tio-, oxo-karbonil- vagy amido-karbonil-csoporttal megszakított 2-12 szénatomos alkiléncsoporton keresztül önmagában ismert módon az 5’-hidroxicsoporttal alkalmasan védett dezoxinukleoziddal összekapcsolunk. Különösen előnyős az (V) általános képletű 5’helyzetben és adott esetben a bázisrészben védett nukleozidok - a képletben Rí jelentése savval lehasítható védőcsoport, így triaril-metil-védőcsoport, például 4- metoxi-tritil- vagy 4,4’-dimetoxi-tritil-csoport vagy tri(rövidszénláncú alkil)-szilil-védőcsoport, például terc-butil-dimetil-szilil-csoport és B jelentése adott esetben védett bázis, a timil-, citozil-, adenil- vagy guanilcsoport közül az egyik - reakciója borostyánkősavanhidriddel adott esetben bázisok, így piridin-, trietil-amin vagy dimetil-amino-piridin jelenlétében, amit a 0,5-2% divinil-benzollal térhálósított, amino-metilezett polisztirollal való, és karbonsavmaradék aktiváló reagensek előnyösen N-hidroxi-szukcinimid vagy pnitro-fenol és vízelvonó szerek, így karbodiimid, például diciklohexil-karbodiimid segítségével lefolytatott reakció követ (1. reakcióvázlat). A reakciót inert, aprotonos oldószerben, például piridinben, tetrahidrofuránban, dioxánban, etil-acetátban, kloroformban, metilén-kloridban, dimetil-formamidban vagy dietil-acetamidban vagy ezek elegyében, szobahőmérsékleten vagy kissé megemelt vagy csökkentett hőmérsékleten, például kb. -10-50 'C hőmérsékleten, előnyösen szobahőmérsékleten, vízelvonó szer jelenlétében alacsony hőmérsékleten is, például 0 "C-on folytatjuk le. A di-, tri- vagy tetranukleotidok találmány szerinti előállításában a b) eljárásváltozat szerint az (V) általános képletű 5’-helyzetben és adott esetben a bázisrészen védett nukleozidokat - a képletben R1 és B jelentése a fenti - (VH) általános képletű aktivált foszforsav-észterekkel - a képletben X1 és X2 egymástól függetlenül hidroxicsoportot vagy abból levezetett sókat, halogénatomot, imidazolil-, 1,2,4-triazol-l-il-, tetrazolil- vagy 1-benztriazolil-oxi-csoportot és X2 kiegészítőleg 2-ciano-etil-oxi-, 2-trihalogén-etil-oxi-, 2-aril-szulfonil-etil-oxi-, 2-(rövidszénláncú alkil)-tio-etil-oxi-, 2- aril-tio-etil-oxi- vagy 2-(4-nitro-fenil)-etil-oxi-csoportot is jelent és R2 jelentése bázissal vagy nukleofil reagenssel, így ammónium- hidroxiddal, tiofenoláttal vagy arilaldoximáttal lehasítható védőcsoport, így adott esetben halogénatommal, nitro- és/vagy rövidszénláncú alkilcsoporttal szubsztituált fenilcsoport, metilcsoporttal vagy adott esetben nitrocsoporttal szubsztituált benzilcsoport, vagy fémionnal lehasítható védőcsoport, például 8- kinolil- vagy 5-kloro-8-kinolilcsoport - reagáltatjuk adott esetben vízelvonó szerek vagy bázisok jelenlétében. Ezután az így kapott (Vili) általános képletű vegyületet - a képletben R1, X2 és R2 jelentése a fenti, először adott esetben 2-helyzetben szubsztituált etanollal reagáltatjuk, ez az X2-csoportot OR3-csoporttá alakítja - a képletben R3 jelentése ciano-etil-csoport, 2-trihalogénetil-csoport, 2-aril-szulfonil-etil-csoport, 2-(rövidszénláncú alkil)-tio-etil-csoport, 2-aril-tio-etil-csoport, vagy 2-(4-nitro-fenil)-etil-csoport - majd az R'-védőcsoportot lehasítjuk és az így kapott (IX) általános képletű vegyületet egy másik (VIII) általános képletű vegyülettel, adott esetben vízelvonó szer vagy bázis jelenlétében (X) általános képletű dinukleotiddá reagáltatjuk (2. reakcióvázlat). Adott esetben valamely (VIII) általános képletű vegyületet bázisokkal és vízzel reagáltatva egy másik (VIII) általános képletű vegyületté alakítunk, ahol a képletben X2 jelentése hidroxicsoport vagy abból levezetett só. A reakciót a fenti inert oldószerek egyikében szobahőmérsékleten vagy kissé emelt vagy csökkentett hőmérsékleten, például szobahőmérsékleten folytatjuk le. Az R'-védőcsoportot savval, így ásványi savakkal, például sósavval vagy kénsavval, karbonsavakkal, például ecetsavval, triklór-ecetsavval, vagy hangyasavval, szulfonsavakkal, például metán- vagy p-toluolszulfonsavval, vagy különösen Lewis-savakkal, például cinkkloriddal, cink-bromiddal, alumínium-kloriddal, dialkil-alumínium-halogeniddel, például dibutil- vagy dietil-alumínium-kloriddal, vagy bór-trifluoriddal hasítjuk le 10-50 'C- on, különösen szobahőmérsékleten. A dialkil-alumínium-halogeniddel való hasítást lipofil oldószerben, különösen toluolban, a fenti Lewis-savak közül egy további alkalmazásával, halogén-szénhidrogénből, például metilén-kloridből és rövidszénláncú alkanolból, például etanolból vagy izopropanolból álló oldószerelegyben végezzük. A (X) általános képletű dinukleotidok találmány szerinti előállítása magában foglalja az (V) általános képletű nukleozidok - a képletben R1 és B jelentése a fenti - (VDA) általános képletű foszfitokkal - a képletben X1 jelentése halogénatom, különösen klóratom, X2 jelentése halogénatom, különösen klóratom, vagy di(rövidszénláncú alkil)-amino-csoport, különösen dimetil-amino- vagy diizopropil-amino-csoport, vagy morfolino-, piperidino- vagy pirrolidino-csoport és R2 jelentése a (VII) általános képletnél megadott, különösen metilcsoport - való reagáltatását adott esetben alkalmas bázis jelenlétében. A találmány szerint előállítható (VÜIA) általános képletű vegyületeket egyrészt 2-helyzetben szubsztituált etanollal reagáltatjuk, ami az X2-csoportot OR3- csoporttá alakítja - a képletben R3 jelentése a fenti - majd oxidálószerrel, például jóddal valamilyen bázis jelenlétében, foszfáttá oxidáljuk és az R'-védőcsoportot lehasítjuk, mimellett (IX) általános képletű vegyület képződik, másrészt valamely (IX) általános képletű vegyülettel reagáltatjuk, majd oxidálószerrel, például jóddal valamilyen bázis jelenlé5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
