203672. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket tartalmazó vakcina előállítására
1 HU 203 672 B 2 A találmány Mycoplasma hyopneumoniae-val (M. hyopneumoniae), pontosabban Mycoplasma hyopneumoniae antigénekkel foglalkozik. A találmány tárgya eljárás Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket tartalmazó vakcina előállítására, amely védelmet nyújt mikoplazmás tüdőgyulladás, főleg sertések mikoplazmás tüdőgyulladása ellen. A Mycoplasma hyopneumoniae által (elsősorban sertésekben) okozott betegség az egész világon előfordul, és ez olyan betegség, amely gyakran a sertések elhullásával jár. A betegség általában használhatatlan, satnya és csenevész állatokat eredményez, és az ezen átesett sertések gyakran hajlamosak egyes jól alkalmazkodó mikroorganizmusok által előidézett másodlagos fertőződésre. Számos kísérlet történt arra, hogy olyan vakcinát állítsanak elő, amely megvédi a sertéseket a mikoplazmás tüdőgyulladás ellen; az ilyen vakcinák azonban nem voltak hatásosak. Kristensen és munkatársai [Am. J. Vet. Rés. 42,784 (1981) ] nem mutatták ki a sertések védelmét mikoplazmás tüdőgyulladás ellen hővel inaktivált Mycoplasma hyopneumoniaeval végzett injekció után. Etheride és munkatársai [Rés. Vet. Sei. 33, 188 (1982) ] csak tökéletlen védelmet mutattak ki a Mycoplasma által előidézett tüdő-tünetek és fertőzés ellen, amikor élő vakcinát adtak be intravénásán, szubkután vagy intraperitoneálisan. Ross és munkatársai [Am. J. Vet. Rés. 45, 1899 (1984)] ismertetik, hogy a Mycoplasma pneumoniae fagyasztás-felengedtetéssel készített extraktumainak alkalmazása csak váltakozó sikerű védelmet nyújt, és bizonyos esetekben növeli a károsodás kifejlődését. Ross és munkatársai azt is kijelentik, hogy egy bizonyos szer injektálása sertésekbe bizonyos szintű védelmet nyújt a légcsövön belüli fertőzés ellen; ez a szer 4 ml felülúszót tartalmaz tüdőgyulladásos, VPP-11 törzset tartalmazó tüdő 10%-os szuszpenziójából, ugyanennek a törzsnek 15-20 passzázsával kialakított törzs 24 órás tenyészetének 1 ml-ével kombinálva. A fentiek eredményeképpen megállapítható, hogy eddig a sertéseket mikoplazmás tüdőgyulladás ellen hatékonyan védő vakcinát még nem sikerült kifejleszteni. A találmány célja vakcina előállítása mikoplazmás tüdőgyulladás elleni védelemre, főleg sertések mikoplazmás tüdőgyulladás elleni hatékony védelmére. A találmány szerinti eljárással vakcinát állítunk elő mikoplazmás tüdőgyulladás ellen, amely vakcina egy vagy több Mycoplasma hyopneumoniae antigént és/vagy ezek fragmentumait foglalja magában, ahol a Mycoplasma hyopneumoniae antigének és/vagy fragmentumaik lényegében mentesek olyan anyagoktól, amelyek immunszuppresszív (az immunrendszert gátló) aktivitással rendelkeznek. Az olyan vakcina, amely lényegében mentes az immunszuppresszív aktivitással rendelkező anyagoktól, maga is nélkülözi az immunszuppresszív aktivitást Felismertük, hogy a természetben előforduló Mycoplasma hyopneumoniae organizmusok antigének sokaságát foglalják magukban, amelyek közül néhánynak immunszuppresszív hatása van, míg másokból hiányzik az immunszuppresszív aktivitás. Azt is felismertük, hogy ha csak az immunszuppresszív aktivitással nem rendelkező Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket és/vagy az ilyen antigének fragmentumait használjuk, az üyen vakcinákat hatékonyan lehet alkalmazni mikoplazmás tüdőgyulladás elleni védelemre, elsősorban sertésekben fellépő mikoplazmás tüdőgyulladás elleni védelemre. Eljárást ismertetünk annak meghatározására is, hogy egy anyagnak vagy kompozíciónak van-e immunszuppresszív aktivitása [Suter M., Kobisch M. és Nicolet J. „Stimulation of immunoglobulin containing cells and isotype specific antibody response in experimental Mycoplasma hyopneumoniae infection in speeifiepathogen-free pigs” (Immunglobulin-tartalmú sejtek és izotípusfajlagos antitest válasz stimulálása kísérleti Mycoplasma hyopneumoniae fertőzésekben, fajlagos patogénmentes sertésekben), Infect, and Immun. 49, 615 (1985)]. Egy előnyös eljárást mutatunk be a 3. példában. A Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket, amelyeket a vakcinában alkalmazunk, Mycoplasma hyopneumoniae organizmusokból, elsősorban Mycoplasma hyopneumoniae organizmusok membránjából nyerhetjük ki. Amint fentebb jeleztük, a Mycoplasma hyopneumoniae organizmusok és elsősorban a Mycoplasma hyopneumoniae organizmusok membránja tartalmazzák mind azokat az antigéneket, amelyeknek van immunszuppresszív aktivitása, mind azokat az antigéneket, amelyek nem rendelkeznek immunszuppresszív aktivitással, következésképpen ahhoz, hogy a vakcinához antigéneket nyerjünk ki, szelektíven kell kiszabadítani azokat a Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket, amelyekből hiányzik az immunszuppresszív aktivitás. Az egyik módszer szerint a Mycoplasma hyopneumoniae organizmus membránját enyhe detergenssel, elsősorban nemionos detergenssel kell kezelni, hogy mind oldható, mind oldhatatlan frakciókat kapjunk. Vizsgálataink szerint az oldhatatlan frakciók foglalják magukban azokat a Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket, amelyekből hiányzik az immunszuppresszív aktivitás, míg az oldható frakció, amelyet enyhe detergenssel végzett kezelés révén kapunk, magában foglal olyan Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket is, amelyekből hiányzik az immunszuppresszív aktivitás, valamint olyan anyagokat is, amelyeknek immunszuppresszív aktivitása van. A Mycoplasma hyopneumoniae organizmusból kapott membrán enyhe detergenssel végzett kezelése révén kinyert oldhatatlan frakciót alkalmazhatjuk állatok mikoplazmás tüdőgyulladása ellen védő vakcina kiszereléséhez, vagy egy másik módszer szerint az oldható frakciót kezelhetjük azoknak az anyagoknak az eltávolítására, amelyeknek immunszuppresszív aktivitása van, és az ilyen módon kialakított frakciót alkalmazhatjuk vakcina kiszerelésére. Egy további változat szerint a Mycoplasma hyopne-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
