203672. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket tartalmazó vakcina előállítására
1 HU 203 672 B 2 umoniae organizmusból származó membránt más szerrel lehet kezelni, hogy szelektíven szolubilizáljuk azokat a felületi antigéneket, amelyek immunszuppresszív aktivitással bírnak, és ezáltal egy oldhatatlan frakcióhoz jutunk, amely olyan Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket tartalmaz, amelyekből hiányzik az immunszuppresszív aktivitás. Az ilyen szolubilizáló szerekre reprezentatív példaként említhetjük az alábbiakat: n-oktil-glükozid; nátríum-dezoxikolát; CHAPS, azaz 3-[(3-kolamido-propil)-dimetU-ammónium]-l-propán szulfonát stb. Másik példaként immunszuppressziv aktivitást nélkülöző Mycoplasma hyopneumoniae antigének kinyerési eljárására mikoplazmás tüdőgyulladás elleni védelemre szolgáló vakcina előállításában való felhasználáshoz megemlíthetjük az elektroforetikus eljárásokat a különböző Mycoplasma hyopneumoniae membrán antigének elkülönítésére oly módon, hogy egy vagy több olyan Mycoplasma hyopneumoniae antigént kapjunk, amelyből hiányzik az immunszuppressziv aktvivitás. A fenti eljárások & más eljárások nyilvánvalóak lesznek az alábbi kitanításokból azok számára, akik a szakterületen jártasak. A találmány szerinti eljárásban bármely Mycoplasma hyopneumoniae törzs alkalmazható, eredetétől függetlenül, ezért konkrét törzset nem jelölünk meg. Azok a Mycoplasma hyopneumoniae antigének, amelyekből hiányzik az immunszuppressziv aktivitás, és amelyeket mikoplazmás tüdőgyulladás elleni védelemre szolgáló vakcinák kiszerelésére használunk, általában legalább 10 kDa molekulatömeggel és általában nem nagyobb, mint 350 kDa molekulatömeggel rendelkeznek. Legtöbb esetben az ilyen antigének 22 kDa és 121 kDa közti molekulatömeggel rendelkeznek. A vakcinák egy vagy több üyen antigént vagy fragmentumait foglalhatják magukban. Amint ez nyilvánvaló, a fragmentumnak a molekulatömege kisebb, mint azé az antigéné, amelyből származik. Az egyik kiviteli módban a vakcina egy vagy több olyan antigént tartalmaz, amelyek az alábbi molekulatömeggel rendelkeznek: 22,5 kDa; 34 kDa; 36 kDa; 41 kDa; 44 kDa; 48 kDa; 52 kDa; 64 kDa; 74,5 kDa; 79 kDa; 88,5 kDa; 96,5 kDa; és 121 kDa. A találmány szerinti eljárásban alkalmazható egy vagy több ilyen antigén a vakcina előállításához, és/vagy lehet alkalmazni ezek fragmentumait is. Az egyik kiviteli mód szerint vakcinát állítunk elő ilyen antigének keverékéből. Lehetséges más antigéneket is alkalmazni, amelyek a fentebb leírt jellemzőkkel rendelkeznek. Az antigént vagy antigéneket jellemző molekulatömegeket szakaszos poliakrilamid gél elektroforézissel kapjuk meg, SDS (nátrium-dodecil-szulfát) pufferrendszerben, amelyet Laemmli írt le (Nature, 227, 680-85 (London, 1970)], 12 % akrilamid koncentrációval és 0,8:30 bisz-akrilamid-akrilamid aránnyal. A nem ionos detergenst olyan mennyiségben használjuk, amely elegendő, hogy szolubilizálja azokat a Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket, amelyeknek immunszuppressziv aktivitása van, anélkül hogy szolubilizálnánk azokat a Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket, amelyekből hiányzik az immunszuppressziv aktivitás. Általában a nem ionos detergens-Mycoplasma hyopneumoniae organizmus rész (amelyet kezelésnek alávetünk) tömeghányadosa 10:1 és 0,05:1 között, előnyösen 5:1 és 0,5:1 között van. A kezelést általában olyan hőmérsékleten hajtjuk végre, amely nem haladja meg a 40 °C-ot, a hőmérsékletet leginkább a 0 6C-37 °C közti tartományból választjuk Id. A kezelést annyi időn át végezzük, amely elegendő ahhoz, hogy azoknak a Mycoplasma hyopneumoniae antigéneknek a szolubiüzálása végbemenjen, amelyek rendelkeznek immunszuppressziv aktivitással, és általában annyi időn át végezzük, amely a 0,5-12 óra közti időtartományban van; bizonyos esetekben azonban rövidebb vagy hosszabb időket is alkalmazhatunk. Az antigének szolubilizálásához alkalmazott oldat ionerőssége általában 0,05-1,0 mól/1 só között van. Egy előnyös szolubilizáló szer 0,2 mól/1 nátrium-iont tartalmaz. Amint fentebb jeleztük, általában a Mycoplasma hyopneumoniae organizmus membránját vetjük alá ilyen kezelésnek. Ilyen membránokat úgy kaphatunk, hogy az organizmust szétzúzzuk a szakterületen általánosan ismert eljárások valamelyikével, pl. fagyasztás-felengedtetés ciklusokkal, ultrahangos kezeléssel stb. Egy másik módszer szerint az antigén vagy antigének származhatnak a teljes organizmusból. A megfelelő módszer kiválasztásáról úgy véljük, hogy az itteni kitanítások alapján a szakterületen jártasság keretein belül van. Bár a találmányt itt főleg a Mycoplasma hyopneumoniae antigéneknek, amelyek nélkülözik az immunszuppressziv aktivitást, itt leírt kinyerésére vonatkoztatjuk, a kinyerést Mycoplasma hyopneumoniae organizmusok kezelésével végezve, magától értetődő, hogy az immunszuppressziv aktivitást nélkülöző Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket más eljárásokkal is kaphatunk, pl. genetikai manipulációkkal. így a találmány oltalmi köre nem korlátozódik az ilyen antigének kinyerésének itt leírt kiviteli módjaira. Hasonlóképpen lehet alkalmazni a fentebb leírt antigének egy vagy több fragmentumát is a találmány szerinti vakcinák előállításához egy vagy több Uyen antigén helyett vagy ezekkel együtt. Az „antigén fragmentuma” kifejezés, ahogyan itt használjuk, az antigén olyan fragmentuma, amely (1) magában foglal egy epitópot, amely olyan antitestet vált ki, amelyet egy Uyen antigén felismer, és amely (2) immunreakcióba lép egy mikoplazmás tüdőgyulladásból felgyógyuló állat (főleg sertés) szérumával. Valamely mikoplazmás tüdőgyuUadás eUeni védelemre, főleg sertések mikoplazmás tüdőgyulladása elleni védelemre szolgáló vakcina egy vagy több olyan Mycoplasma hyopneumoniae antigénből áll, amelyek nélkülözik az immunszuppressziv aktivitást, vagy ezek fragmentumaiból, amint ezt fentebb leírtuk, megfelelő fiziológiailag elfogadható hordozóval kombinálva. Az Uyen Mycoplasma hyopneumoniae antigéneket 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
