203565. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kis molekulatömegű heparin, heparán-szulfát, dermatán-szulfát és sóik, valamint ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 203 565 B 2 A termék jellemzői: S- 6,16%, uronsav- 30,84%, SO3OH eq/COOH eq-1,21. Átlagos molekulatömeg (M.W.) -6000 dalton (Protein Pák 125 kolonnán (Waters) HPLC-vel történő meghatározás). Áramlási sebesség: 1 ml/perc, mozgó fázis: 0,125 mól/l-es Na2S04 oldat, amelyet 2 mmól/l-es Na2HP04/NaH2P04 2 mmól/1 oldattal 6 pH-ra puff erőiünk). Törésmutató detektálás. 13C-NMR (IMS külső standard és metanol belső standard, amelynek a kémiai eltolódás 51,75 ppm): 8 ppm 104,8 (C-l iduronsav), 103,37 (C-l amino-cukor-4-O-szulfát), 60,72 (C-6 amino-cukor-O-szulfát), 52,95 (C-2 amino-cukor-NAc.) [a]--60 (vízben) ”in vivo” antitromotikus aktivitás: 24,7 egység ”in vitro” U-APTT: 2 nemzetközi egység/mg. Kondroitin-szulfát 1. Összehasonlító példa 10 g kondroitin-szulfátot (molekulatömege nagynyomású folyadékkromatográfiás meghatározás szerint > 45000, aktivitás értékei az L, illetve a B táblázatban megadottak) 250 mg réz-acetáttal együtt 100 ml vízbe viszünk. Az elegyhez cseppenként 30 ml 15%-os hidrogén-peroxidot adunk mintegy egy óra alatt 37 és 40 'C közötti hőmérsékleten. Az elegy pH- ját állandóan 7,5 értéken tartjuk 12 ml n NaOH beadagolásával. Az oldatot ezután 20 *C-ra hűtjük, ecetsavval pH- 5,8-ra állítjuk, majd háromszoros térfogat metü-alkoholt adunk hozzá. A kapott csapadékot kiszűrjük, és a vizes alkoholos oldatot (A oldat) félretesszük. A csapadékot 30 ml vízben oldjuk, és az oldatot 2 cm átmérőjű, 12 cm magas Chelex 100 gyanta oszlopra viszszük. Az oszlopról lefolyó oldatot és az oszlop mosására alkalmazott vizet kétszeres térfogatú etanollal elegyítjük. A kapott csapadékot szűréssel elkülönítjük, majd szárítjuk. 4,1%-os hozammal 0,41 g 4000 dalton molekulatömegű terméket nyerünk, amely sem in vitro, sem in vivo aktivitással nem bír. Az előzőekben ismertetrtt 12. példában azonos elmatán-szulfátot. A vizes-alkoholos Aoldatot besűrítjük, és a szervetlen sóktól mentesítjük. 5,1 g cukor-bomlásterméket, például aldonátokat találunk benne, amely bomlástermék feltehetően peroxid-gyökös mechanizmus eredménye [Isbell. H. J. és munkatársai, Carbohydr. Rés. 161,181 (1987)], és nem bír semmiféle aktivitással. 2. Összehasonlító példa 10 g, a 870,094 számú német szabadalmi leírás szerint előállított kondroitin-poliszulfátot az 1. összehasonlító példa szerinti eljárással polimerizálunk. így 7,3 g alacsony, átlagosan 4500 dalton molekulatömegű kondroitin-szulfátot nyerünk, amelynek diszperzivitása (D)- 1,32 (nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat alapján). A termék a következő aktivitásokkal bír: USP/mg- 1,4; U-APTT/mg-1,3; U-AXa/mg-/ 5; LPL-RU/mg- 26. 3. Összehasonlító példa 10 g kondroitin-poliszulfátot a 2 098 232 A számú nagy-britanniai szabadalmi bejelentés la példájának A lépése szerint depolimerizálunk. 7,7 g terméket nyerünk, amely 35000 és 6000 dalton között folyamatos molekulatömeg-eloszlású biológiai jellemzői a következők: USP/mg- 3; U-APTT/mg- 2,1; U-AXa/mg/ 5; LPL-RU/mg- 26. A 2 098 232 A számú nagy-britanniai szabadalmi bejelentés terméke gyökös depolimerizálási eljárásnak kitett mesterségesen poliszulfatált kondroitinszulfát. A depolimerizált termék jellemzői:- 15000-6000 dalton molekulatömeg,- a dimerenként 2,7 és 3,4 szulfátcsoport szulfatálási foknak megfelelő kéntartalom 2,7, illetve 3,4 S03’ /COO'-aránnyal ekvivalens,- a fajlagos forgatás [@a#]- -12*, amely 6-kondroitin-szulfátéhoz (kondroitin C) közeli érték. Ezzel szemben a találmány szerint előállított LMW heparin, LMW-DS, valamint LMW-HS a molekulatömegtől eltekintve a természetes termékével analóg szerkezetű. A gyógyhatás-összevetésből kitűnik, hogy a 2 098 232 A számú nagy-britanniai szabadalmi bejelentésben említett kondroitin-poliszulfátnak igen nagy a lipáz aktivitása és minden dózisnál vérzési rendellenességeket okoz, valamint nem bír antitrombotikus vagy fibrinolitikus hatással és biológiaüag nem felhasználható, amely tulajdonságok eltérnek a találmányszerinti eljárással kapott termékek jellemzőitől. A következő A. táblázatban néhány glükóz aminoglükán kémiai különbségeit tüntettük fel, míg a B táblázatban néhány biológiai aktivitást adunk meg, amelyek szemléltetik, hogy eltérő kémiai szerkezet meglepő biológiai aktivitásbeli különbségeket eredményez. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 10
