203563. lajstromszámú szabadalom • Eljárás opioid-polipeptidek és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 203563B sav/kloroform 4.1:12 arányú elegyével). [ct]D= -47° (c= 1, metanol). Elemanalízis a C26H31N3O7CI2.1/2C2H5OC2H5 összegképlet alapján: számított: C: 55,54, H: 5,99, N: 6,94%, talált: C: 55,45, H: 5,81, N: 6,89%. 7. lépés: Boc-CH3Tyr(Cl2Bzl)Gly- Gly-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 előállítása 682 mg Boc-CH3Tyr(Cl2Bzl)-Gly-Gly-OH és 195 mg N-hidroxi-benzotriazol 4 ml dimetü-formamiddal készült oldatához jéghütés közben 272 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk, majd 2 órán át tartó keverés után 1,167 g CF3COOH.H-Phe-Leu- Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-NHC2H5 (amelyet Boc-Phe-Leu-Arg(Tos)-CH3Arg (Tos)-D-Leu- NHC2H5 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével állítottunk elő), 0,132 ml N-metilmorfolin és 8 ml dimetü-formamid elegyét adjuk hozzá, és a reakcióelegyet éjszakán át hűtőszekrényben keverjük. Az így képződött csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet betöményít jük. A maradékot szüikagélből készült oszlopon kromatografáljuk, az eluálásra metanol és kloroform 1:20 arányú elegyét használjuk. Az így kapott terméket metanol és éter keverékével kezelve 1,391 g hozammal szüárd alakban kapjuk a 7. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 130-135 °C (bomlás közben). VRK: Rf-értéke 0,64 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével). [ot]D= -35,3° (c= 1, metanol) Elemanalízis a C76H105N15O15S2CI2.CH3OH.H2O összegképlet alapján: számított: C: 55,92, H: 6,77, N: 12,70%, talált: C: 56,06, H: 6,49, N: 12,52%. 8. lépés: CH3 Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-CH3Arg-DLeu-NHC2Hs előállítása 220 mg 7. lépésben készült vegyületet 0,2 ml anizol jelenlétében 10 ml hidrogén-fluoridban oldunk, zárt, a hidrogén-fluoridnak ellenálló reakcióedényben -5 °C hőmérsékleten. Ezután az elegyet 1 órán át keverjük, majd a hidrogén-fluoridot a reakciórendszerből kidesztilláljuk. A maradékot éterrel mossuk, majd vízben oldjuk. Az oldatot Amberlit ERA-93 (ecetsav-típusú) gyantával kezeljük, és liofilizáljuk. így 120 mg nyers peptidet kapunk, amelyet magas nyomású folyadékkromatográfiával (Nucleosü 5 C 18,2 0 x 25 cm) tisztítunk, az eluálást 0,1% sósavat tartalmazó 81:91 arányú víz-acetonitril eleggyel végezzük, s a terméket liofilizálva 70 mg hozammal kapjuk a 8. lépés, azaz az 1. példa cím szerinti vegyületét (a végterméket). VRK: Rf-értéke 0,70 (kifejlesztés butanol/ecetsav/piridin/víz 15:5:5:8 arányú elegyével). [a]D= -21,8° (c- 0,4,0,01 n sósav). Tömegszínképi jellemzője (FAB): 1036 (/M+HT) Az aminosav-elemzés eredményei: Gly 1,87 (2); Leu 1,96 (2); Phe 1,00(1); Arg 0,95(1). (A CH3Tyrnak és CH3Arg-nak megfelelő csúcsokat nem számítottuk ki.) 13 14 2. példa Tyr- D-Cys-Gly-Phe-Cys-Arg-CH3Arg-D-Leu- Arg-NH2 1. lépés: Boc-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 előállítása 2,493 g Boc-D-Leu-OH.H20 10 ml dimetil-formamiddal készült, -20 °C-ra hűtött oldatához 1, Imi N-metü-morfolint és 0,96 ml etü-(klór-formiát)-ot adunk, 5 percen át állni hagyjuk, s utána 4,414 g CF3COOH.H-Arg(Tos)-NH2 és 1,65. ml N-metümorfolin 20 ml dimetü-formamiddal készült oldatát adjuk hozzá, és az elegyet körülbelül -5 °C-on két órán át keverjük. A betöményítés után kapott maradékot etil-acetátban oldjuk, és előbb nátriumhidrogén-karbonát-oldattal, majd vízzel mossuk. A szerves fázis betöményítése után kapott maradékhoz étert adva 4,96 g hozammal szüárd termék alakjában kapjuk az 1. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 110-120 °C (bomlás közben). VRK: Rf-értéke 0,49 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével). [a]D= +13,0° (c= 1, metanol) Elemanalízis a C24H40N6O6S.I/3H3O összegképlet alapján: számított: C: 52,73, H: 7,50, N: 15,37%, talált: C: 52,77, H: 7,60, N: 15,14%. 2. lépés: Z-CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2előáüítása 3,336 g Z-CH3Arg(Tos)-OH 30 ml tetrahidrofuránnal készült és -20 °C-ra hűtött oldatához 0,77 ml N-metü-morfolint és 0,67 ml etü-(klór-formiát)-ot adunk, 5 percig áüni hagyjuk, majd 3,882 g CF3COOH.H-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 anizol jelenlétében végzett trifluor-ecetsavas kezelésével kaptunk) és 1,17 ml trietü-amin 30 ml tetrahidro-furánnal készült oldatát adjuk hozzá, majd körülbelül -5 °C hőmérsékleten 2 órán át keverjük. A betöményítés után kapott termékhez metanol és víz elegyét adva 6,14 g hozammal kapjuk szüárd alakban a 2. lépés cím szerinti vegyületét, olvadáspont: 110-113 °C (bomlás közben). VRK: Rf-értéke 0,44 (kifejlesztés metanol/kloroform 1:7 arányú elegyével). [a]D= -3,4° (c= 1, metanol). Elemanalízis a C41H48N10O9S.CH3OH összegképlet alapján: számított: C:54,18,H:6,71,N: 15,04%, talált: C: 54,12, H: 6,62, N: 14,85%. 3. lépés: Boc- Arg(Tos)-CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)NH2előáüítása 4,734 g CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 (amelyet Z-CH3Arg(Tos)-D-Leu-Arg(Tos)-NH2 csontszenes paüádium-katalizátor jelenlétében végzett hidrogénezésével állítottunk elő), 2,918 g Boc-Arg(Tos)-OH és 1,1 g N-hidroxi-benzotriazol 17 ml dimetü-formamiddal készült oldatához jéghűtés közben 1,543 g diciklohexü-karbodiimidet adunk, majd az elegyet egy napon át hűtőszekrényben, s utána 1 napon át szobahőmérsékleten keverjük. A csapadékot kiszűrjük, és a szűrlet betöményítése után kapott maradékot szüikagélből készült oszlopon kromatografáljuk. Az eluálást metanol és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
