203556. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fenollal helyettesített geminális difoszfonátszármazékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 Hü 203 556 B 2 tűk, az oldatot a pellettált takarmányhoz adtuk, és az étert elpárologtattuk. A vegyületeket 0,1% végső koncentrációban vizsgáltuk a takarmányban, amely napi 180 mg/kg bevitelnek felel meg. Ezt a diétát adtuk 10-napig, majd egy éjszakai koplaltatás után az állatokat éteres anesztézia közben lefejeztük. Vérmintákat vettünk EDTA- tartalmú csövekbe. A plazma koleszterint és plazma triglicerideket enzimes módszerrel mértük (Ames-készlet No. 6376 és No. 6630). Az átlag koleszterin, illetve triglicerid értéket minden vizsgált vegyületet, illetve referenciahatóanyagot kapott csoport esetén a párhuzamos kontrollcsoportnál megfigyelt átlagérték %-ában fejeztük ki. 2. Eredmények Amint a ID. táblázat mutatja, számos difoszfonátszármazék(3., 4., 5., 6., 7., 18., 21., 22., 23., 24., 33., 34., 37., 47. és 48. vegyület) kifejezetten hipokoleszterinémiás hatású, legjelentősebben a 33. és 34. vegyület (- 40% és -41 %). A klinikailag a hiperlipidémia kezelésére használt Clofibrát, gemfibrozil és fenofibrát kevésbé volt hipokoleszterinémiás hatású, mint a vizsgált difoszfonátok közül sok. A vizsgált referencia hatóanyagok közül a fenofibrát volt a leghatékonyabb (- 15%). Hasonló hipokoleszterinémiás aktivitást mértek olyan egereknél, amelyek fibrátszármazékokat kaptak, amint ezt a fent idézett publikáció közli (Olivier, P. és munkatársai). Szignifikáns hipotrigliceridémia volt megfigyelhető a 3., 5., 6., 7., 21., 22., 23., 24., 30., 31., 33., 37., 47. és 48. vegyületek esetén. Megjegyzendő, hogy a 3., 19., 24., 30., 37. és 47. vegyület a plazma triglicerideket több, mint 44%-kal csökkentette, azaz olyan értékkel, amelyet a párhuzamosan vizsgált referencia-hatóanyagokkal nem értünk el. A gemfibrozil volt a leghatékonyabb hipotrigliceridémiás referencia hatóanyag (-35%), amely megfelel az irodalomban ismertetett értékeknek. Az egzakt mechanizmust, ahogyan ezek a difoszfonátok külöböző in vivő modellekben csökkentik a plazmalipideket, nem ismerjük. In vitro kísérletek azonban azt mutatták, hogy ezek a vegyületek néhány, a koleszterinszintézisben és a metabolizmusban kulcsszerepet játszó enzimet gátolnak, illetve ezekkel interferálnak, ilyen különösen az acü-CoA koleszterin-acü-transzferáz (ACAT), lipázok stb., ami jelzi a lehetséges hatásterületet. b) Gyulladásgátló aktivitás 1. Módszerek Négy kiválasztott difoszfonát hatását vizsgáltuk a kappa-karragenán által kiváltott gyulladásos válaszra nézve patkánymancs ödéma-modellben. Csoportonként 8 hímnemű patkányt alkalmaztunk, ödémát indukáltunk az állatok jobb hátsó mancsán 0,1 ml 1 tömeg/térf.%-os kappa-karragenán-oldat (0,9%-os nátrium-kloridban oldva) egyszeri injektálásával a plantáris aponeurózisba. A tesztvegyületeket (100 mgőcg) és a referencia hatóanyagot (indometacin 30 mg/kg) 1 órával az ödéma karragenán-injekciós indukálása előtt adagoltuk. A jobb hátsó mancs térfogatát mérjük a nulladik, első, 2,5 és 4. órában a karranegán-injekció után (csak a 4 órás értékeket ismertetjük). 2. Eredmények Amint a IV. táblázatból látható, az indometacin a várt módon teljesen megakadályozta a mancs térfogatának növekedését. A 8. és 36. vegyület jelentős gátlóhatást mutatott, míg ezek etilészter megfelelői csak minimális aktivitást mutattak. Az eredmények azt jelzik, hogy a difoszfonsavak, mint például a 8. vegyület, gyulladásgátló hatásúak ebben az állatmodellben. Q Orális hipotenzfv aktivitás hipertenzív patkányok esetén A spontán hipertenzív patkány (SHR) a humán artériás hipertenzió jól meghatározott állatmodellje. Úgy találtuk, hogy az (I) álalános képletű geminális difoszfonátok kifejezett hipotenziót indukálnak SHR- eknek adagolva. A vizsgálatok során különböző geminális difoszfonátokat oldottunk Tween-80-ban, és orálisan adagoltuk SH patkányoknak. A vérnyomást óránként ellenőriztük farokmandzsetta módszerrel. Az adagolás után két órával mért hipotenz9ót összef oglaltuk az V. táblázatban. A 4., 6., 7. és 18. vegyület 30-50%-kal csökkentette a vérnyomást, és annyira hatékony volt, mint a párhuzamosan vizsgált referencia hatóanyagok, amelyeket angina pectoris és hipertenzió kezelésére használnak. Az (I) általános képletű geminális difoszfonátok tehát potenciálisan használhatók kardiovaszkuláris betegségek kezelésére a simaizom relaxációs aktivitás folytán. Ezeknek a vegyülcteknek a primer indikációja lehet angina pectons, vér tolulásos szívbetegségek és hipertenzió kezelésében. III. táblázat (I) általános képletű difoszfonátok és referencia hatóanyagok hipolipidémiás aktivitása Vegyület Koleszterin (% kontroll) Trigliceridek (% kontroll) 1.-2-28 2. 46-17 4.-12-1 6.-37-34 7.-23-15 8.-2 419 10.-5-19 19.-6-44 3.-19-46 5.-22-24 33.-40-21 30. 42-45 31. 44-11 35. O 47 36.-9-5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 60 55 60 11
