203552. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxetanocin-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
1 HU 203 552 B 2 reskedelmi tennék (például Sigma Co., EC 3.5A4). Emellett alkalmazhatók még állati szövetből vagy tenyésztett mikroorganizmusokból elkülönített termékek, az ebből előállított adenozin-dezamináz, valamint az eredetitől függetlenül bármely más termék, amely azonos hatással rendelkezik. A találmány szerinti eljáráshoz nincs szükség tisztított enzim alkalmazására. Mikroorganizmusból származó enzim alkalmazása esetén használható a mikroorganizmus tenyésztett terméke, amelyet az adenozin-dezaminázt termelő mikroorganizmus megfelelő tápközegben történő tenyésztésével kapunk. Emellett alkalmazható a mikroorganizmus acetonnal szárított termékéből előállított nyers enzim preparátum, a mikroorganizmus sejt alapterméke, ennek utlrahanggal kezelt formája, valamint a felületaktív anyaggal, toluollal vagy lizozimmal kezelt formája, továbbá természetes vagy szintetikus polimeren immobüizált sejt. Mikroorganizmusként alkalmazhatók például a következők. Alkaligenes booked IFO12948 Escjerocjeoa cpéo NUH Escherichia coli 120551 Escherichia coli 120595 Escherichia coli 120628 Citrobacter freundii GN346 Proteus morganii IFO 3168 ElytrosporanimbrasüienselFO 1259 Nocardia asteroides IFO 3423 StreptomycesalbonigerIFO 12738 Streptomyces califomicus IFO 12750 Streptomyces chrestomyseticus IFO 13444 Streptomyces subsp lasaliensis ATCC 31180 Streptomyces tubercidicus IFO 13090 Streptomyces verticillus ATCC 31307 Aspergillus niger IFO 4066 Fusarium roseum IFO 7189 Penicillium chrysogenum JBI-FI Penicillium chrysogenum 51-20T 13. példa [a (13) képletű vegyület előállítása] 3,5 mg (1) képletű vegyületet 1,75 ml 0,1 mól/liter foszfát pufferben oldunk, amelyhez 10 mikroliter (14,6 egység) adenozin-dezaminázt (Sigma Co., EC 3.S.4.4) adunk. A reakcióelegyet 4,5 órán keresztül 37 °C hőmérsékleten kevertetjük. Ezután 6,5 ml MCI GEL CHP20P gyantával töltött oszlopra visszük, az oszlopot vízzel mossuk és az adszorbeált anyagot 20 ml, 20 tömeg% vizet tartalmazó metanollal eluáljuk. Szüikagéles vékonyrétegkromatográfiás vizsgálattal (Merck, 5715, oldószer: 1-butanol/ecetsav/víz 4:1: 2) összegyűjtjük a mintegy Rf-0,35 értékű frakciókat és az oldószert ledesztillálva 3,34 mg (95,0%) (13) képletű vegyületet kapunk színtelen por formájában. (13) képletű vegyület: MS m/z: 222 (M+); NMR (400 MHz, D20) ppm: 8,49 (1H, s, 8-H), 8,12 (1H, s, 2-H), 6,64 (1H, dd, J=7,0 Hz; l’-H), 4,94 (1H, m, 3’-H), 3,86-3,73 (2H, m, 3’Cff2OH), 3,32-3,15 (2H,m,2’-CH2-) 14. példa [a (14) képletű vegyület előállítása] (C reakcióvázlat) Nitrogénatmoszférában 0,52 mg 4-dimetü-aminopiridint, 86,7 mikroliter trietüamint és 139,9 mg 4,4’dimetoxi-tritü-ldoridot adunk 50 mg (XI)" képletű vegyület (oxetanocin G) 1,6 ml vízmentes dimetü-formamidban felvett oldatához. A reakcióelegyet sötétben 24 órán keresztül szobahőmérsékleten kevertetjük, az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a kapott szirupot szüikagéllel töltött oszlopon 20 ml kloroform/metanol 50:1 eleggyel tisztítjuk. Szüikagéles vékonyrétegkromatográfiás vizsgálattal (oldószer-kloroform/metanol 10:1 összegyűjtjük a mintegy Rf=0,51 értékű frakciókat és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. így 27,1 mg (16,6%) (XH) képletű vegyületet [DMTR(CH3OC6H5)2C(C6H5)-] kapunk színtelen por formájában A mintegy Rf=0,64 értékű frakciók összegyűjtésével és az oldószer csökkentett nyomáson történő ledesztillálásával 42,0 mg (25,8%) (Xlla) képletű vegyületet kapunk. Nitrogénatmoszférában 0,4 mg 4-dimetü-aminopiridint, 19,2 mikroliter trietüamint és 10,9 mikroli£) tér valeril-kloridot adunk 30 mg (XH) képletű vegyület 1 ml vízmentes diklór-metánban felvett oldatához és a*' reakcióelegyet 1,5 órán keresztül szobahőmérsékleten" kevertetjük. Az oldószert csökkentett nyomáson le-"“ desztilláljuk és a kapott szirupot szüikagéllel töltött oszlopon 20 ml kloroform/metanol 60:1 eleggyel tisz-, ti tjük. Szüikagéles vékonyrétegkromatográfiás vizs-" gálattal (oldószer=kloroform/metanol 20:1) össze-'' gyűjtjük a mintegy Rf-0,38 értékű frakciókat és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztüláljuk. így 16,2 mg (47,2%)(XHI) képletű vegyületet kapunk szirupformájában. (Xm) képletű vegyület: NMR (400 MHz, CDQ3, TMS) ppm: 7,79 (1H, s) 7,41 (1H, s), 7,39 (1H, s) 7,16-7,30 (18H, m), 6,78- 6,83 (8H, m) 6,04 (1H, d, J=5,5Hz, l’-H), 4,65 (1H, m, 3’-H), 4,36 (1H, m, 3’-CH20-a), 4,18 (1H, m, 3’-CH20-b) 3,77-3,73 (12H, 4xMeO), 3,43 (1H, m, 2’-H), 3,29 (2H, m, 2’-CH20-), 2,34 (2H, m) 1,59 (2H, m) 1,29 (2H, m), 0,88 (3H, m) 16,2 mg (Xm) képletű vegyületet 90 tömeg%-os vizes ecetsavban oldunk és 2,5 órán keresztül szobahőmérsékleten kevertetjük. Az oldószert csökkentett nyomáson ledesztüláljuk, a kapott szirupot 80 tömeg%-os vizes metanolban oldjuk és 100ml, előzetesen a fenti oldószerrel kiegyenlített Sephadex LH20 gyantával töltött oszlopon tisztítjuk. Szzüikagéles vékonyrétegkromatográfiás vizsgálattal (oldószer-nbutanol/víz/ecetsav 4:2:1) összegyűjtjük a mintegy Rf-0,58 értékű frakciókat, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztüláljuk. így 5,5 mg (86,4%) (14) képletű vegyületet kapunk színtelen por formájában. (14) képletű vegyület: NMR (400 MHz, CD3OD, TMS) ppm: 8,08 (1H, s, 8-H), 6,33 (1H d, J=5,9 Hz, l’-H), 4,79 (1H, m, 3’-H), 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 13
