203372. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hyaluronsav asszociátumok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint kozmetikai készítmények
7 HU 203 372 B 8 2. táblázat az uícusok száma és score-értékük készítmény hatóanyag 90% fclcU 90-70% közölt 70-50% között 50% alatt Lilét Zn-hyaluronát 2 7 5 0 Na-hyaluronát 8 3 0 1 2. hét Zn-hyaluronát 0 6 7 1 Na-hyaluronát 4 3 5 0 3. hét Zn-hyaluronát 0 1 8 2 Na-hyaluronát 2 5 5 1 4. hét Zn-hyaluronát 2 1 7 3 Na-hyaluronát 1 5 3 3 A táblázat adatai ugyancsak a cink-hyaluronát előnyét jelzik. A részletesebb statisztikai vizsgálatok a kezdési idő függvényében csökkenő szignifikanciát mutatnak. Összefoglalva a klinikofarmökológiai vizsgálatok értékelése során már a viszonylag alacsony ulcus szám mellett is igazolható volt a cink-hyaluronát nagyobb hatékonysága, s különösen erősen bizonyított a kezelés kezdeti időszakában mutatkozó előnye. A találmányunk szerinti cink-hyaluronát asszociátumot tartalmazó kozmetikai készítményekkel is kiemelkedően jó eredményeket értünk el- a bőrápolás pl. bőrtápláló-, hidratáló-, testápoló-, ránctalanító készítmények,- a kozmetika terűidhez tartozó bőrelváltozások hámsériiléssel járó égések, horzsolások és- ugyancsak a kozmetikai területhez tartozó pubertaskori kiütések, pattanások kezelése pl. acne vulgaris területén. A kozmetikai készítmények előnyösen különböző konzisztenciájú krémek, kenőcsök, gélek, zselék vagy oldatok lehetnek, amelyeket a felhasználásnak megfelelően választunk ki. A hidratáló krémd 25 egyénen vizsgáltuk, mindegyikük 5 tubust használt el. Kellemetlen mellékhatást (pl. dermatitiszt) egyikük sem észlelt Ketten úgy ítélték meg, hogy a cink-hyaluronátot tartalmazó készítmény hatásos azonos egy - hasonló célra készült - kozmetikuméval, 23 fő viszont határozottan jobbnak ítélte azt A cink-hyaluronát asszociátum hatásosságát a pubertáskori acne vulgaris-ra 75 főn vizsgáltuk. 50 egyednél zselét, 25-nél oldatot alkalmaztunk. Sem a zselé, sem az oldat nem mutatott kellemetlen mellékhatást A 75 fő közül 69 egyénen jelentékenyen gyorsabb volt a hatás, mint egy - hasonló célra készített kozmetikum esetében, 4 esetben a hatás gyengébb volt Különlegesen jó hatást értünk el a cink-hyaluronátot tartalmazó arcpakolásnál. Mind a 23 fő igen előnyösnek ítélte ezen kozmetikumunkat A találmányunkat közelebbről a példák szemléltetik, anélkül, hogy oltalmi igényünket azokra korlátoznánk. A hyaluronát (HA) fehérje tartalmát O. H. Lowry módszerével [J. Bioi. Chem. 193 (1951]; viszkozitását Ostwald viszkoziméterrel 25 *C-on határozzuk meg fiziológiás nátrium-klorid oldatban. A belső v. intrinsic viszkozitás „O” koncentrációra extrapolált értékét adjuk meg [ti] A HA tartalmat Bittér módszerével [Anal. Biochem. 4 330 (1962)] határoztuk meg. 1. példa Cink-hyaluronát oldat készítése 40,18 mg nátrium-hyaluronátot 20,0 cm3 kétszer desztillált vízben feloldunk. így a hyaluronsav induló koncentrációja 2,009 mg/ml, az oldat ekvivalens koncentrációja 4,241 x 10~3 mól.dm3 (Na+, ill. hyaluronsav dimer egység). A mérés során 0,05154 mól.dm'3 koncentrációjú ZnCl2 oldatot juttatunk mikrobürettával a rcakcióelegybe először kisebb (0,05 ml) majd nagyobb (0,1-0,2 ml) térfogatban folytatva az adagolást Az oldatban az elektromotoros erő (potenciál) változást digitális kijelzésű precíziós potenciométerrel nátriumion szelektív üveg- és ezüst-ezüstklorid elektródok alkalmazásával mérjük. A bírálási mindaddig folytatjuk, amíg a mért potenciál az újabb mérőoldatrészlet hozzáadására tovább már nem változik. (A mérőrendszert az érdemi méréssel analóg körülmények között hitelesítettük.) A fenti értékeléshez ellenőriztük a nátriumionszelektív elektród szelektivitását Zn2* ionok jelenlétében is annak ellenőrzésére, hogy az érdemi mérés során a potenciál változást a szabaddá váló Na*-ionok, és nem az oldatba juttatott Zn2* ionok okozták, 2,00 x 1CT3M NaCl oldatot fentiekkel azonos körülmények között a ZnCl2- mérőoldattal megtitráltuk. Zn2*-t 0-ról 4 x 10~3 mól.dm 3-re növelve mintegy 2 mV-nyi potenciálnövekedést tapasztaltunk, míg az érdemi mérés analóg körülmények között kb. 20 mV változást hozott. így az értékelésnek nem volt akadálya. A mérési adatokból számított nátriumion aktivitás növekedés a mérés során igazolta a cink-asszociátum képződésének kvantitatív voltát Cink-klorid oldat készítése Cink-kloridból beméréssel pontos koncentrációjú oldat nem készíthető, ezért első lépésben közelítőleg a kívánt koncentrációjú oldatot készítjük el. Az oldat készítésénél külön savat nem szabad használni, így előfordulhat, hogy a bemért cink-klorid nem oldódik fel teljesen. Az oldhatatlan maradék kiülepedése után (kb. 1/2 óra) a mérőlombikot jelre töltjük és az oldatot szűrőpapíron leszűrjük. A leszűrt oldat pontos koncentrációját komplexometriás titrálással határozzuk meg, puffer 10 és eriokrómfekete-T indikátor alkalmazásával. A pontosan 0,110 mól.dm'3 koncentrációjú cink-klorid oldatot ennek az oldatnak pontos hígításával készítjük. Az oldat készítéséhez használt nátrium-hyaluronát adatai: molekulatömeg: 1 850 000 dalton, fehérjetartalom: 0,07 tömeg% UV abszorpció 1 0,133 X &: 0,075 viszkozitás [ti] -» ^c“: 13,7 dl/g Ha* tartalom: 98,12 tömeg% *HA (hylauronsav) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
