203371. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új inzulin-származékok és az azokat tartalmazó injekciós oldatok előállítására
11 HU 203 371 B 12 kiegészítés), 4. oldal (1983)], vagyis egy egység megfelel 5,95 nmólnak. így olyan injekciós oldatokat állítunk elő, amelyekben a II. táblázatban megadott (I) általános képletű vegyidet 240 nmól/ml koncentrációban van jelen, a II. 5 táblázatban megadjuk továbbá az oldat pH-ját és cink-ion koncentrációját. A nyújtott inzulin-hatás időtartamának meghatározása Az inzulin-származékok injekciós oldataival kivál- 10 tott hipoglikémiás hatás időtartamát az 1980. évi brit Gyógyszerkönyv szerint (A 142) határozzuk meg, éheztetett nyulakon. A vizsgálandó oldatokat 12, egyenként 3-4 kg testsúlyú nyúlnak szubkután (bőr alá) adjuk be, mégpedig minden állatnak 14,3 nmól dózisban, és a 15 hipoglikémiás hatás lefutását 6 órán át követjük, összehasonlítás céljából e vizsgálatba bevonjuk az ActrapidTM nevű, gyorsan ható sertés inzulin-készítményt, és a MonotardTM nevű, közepesen nyújtott hatású humán inzulin-készítményt. E vizsgálatok eredményeit a II. táblázatban foglaljuk össze. Az inzulin-származékok hatását egéren, a vércukor felszabadulást mérő vizsgálattal határozzuk meg, az 1980. évi brit Gyógyszerkönyv szerint (A 141 - A142). Abból a célból, hogy a hatásukat időben az összehasonlító anyaghoz képest eltérően kifejtő inzulin-származékok hatását összehasonlíthassuk, a hatás erősségének meghatározásához használt inzulin-származék-oldatokat cink hozzáadása nélkül készítjük el. Az elkészített oldatok koncentrációja a 276 nm hullámhossznál mért abszorpció alapján: 240 nmól/ml. Az oldatok cink-tartalma: 8-10 pg/ml, ez a cink-tartalom a kristályos származékokból ered. Néhány inzulin-származék hatásának becsült erősségét az alábbi III. táblázatban adjuk meg. II. táblázat (I) általános képletű vegyület Cink(II)-ion koncentráció, pg/ml pH 1 óra Glükóz koncentráció, a kezdeti érték %-ában kifejezve 2 4 óra óra 6 óra GlnA17ArgB57 humán inzulin 80 4,5 53 47 50 66 GlnBl3,ArgB27 humán inzulin 80 4.5 55 46 61 91 GlnA17,GlnB13 humán inzulin 80 4.5 53 47 55 82 Arg827 humán inzulin 80 4.5 45 34 51 91 LysB27 humán inzulin 80 4.5 47 40 55 93 AspA21^VrgB27,ThrB30-NH2 humán inzulin 80 4 60 54 58 60 Asp*21 ArgB273-ysB30-NH2 humán inzulin 80 4 72 67 61 59 GlyA21,AígB27,ThrB30-NH2 humán inzulin 8 4 59 62 71 74 GlyAM,AigB2,,ThrB30-NH2 humán inzulin 80 4 72 73 74 74 HisA21,AxgB27 humán inzulin 80 4 65 53 66 88 HisA2I,ArgflZ7,ThrB30-NH2 humán inzulin 80 4 61 52 52 72 GlyA21tAigBZ,,GlnB13,ThrB30-NH2 humán inzulin 80 4 82 86 85 90 SerA21,ArgB27,Glní'3,TrhB30- -NH2 humán inzulin 80 4 90 91 88 92 ThrAa,ArgB27,GlnB13,TrhB30- -NH2 humán inzulin 80 4 90 90 88 93 SerA21tArgB27,ThrB30-NH2 humán inzulin 80 4 60 62 64 68 ActrapidTM sertés inzulin 15 7 46 44 74 91 MonotardTM humán inzulin 80 7 54 43 50 74 III. táblázat A hatás erőssége, az inzulin hatásának Megbízhatósági határok %-ában kifejezve (p = 0,05),% GlnA17,ArgB27 humán inzulin 69 79-62 GlnBl3,AigB27 humán inzulin 78 88-69 GlnB13,GlnAl7 humán inzulin 50 63-40 Arg827 humán inzulin 87 95-80 LysB27 humán inzulin 88 97-80 7
