203330. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxazolidin-2-on-származékok és az azokat tartalmazó hipoglikémiás hatású készítmények előállítására
1 HU 203 330 B 2 reagáltatjuk, egy konszolvensben. Jellegzetes savak a következők: HCl, HNO3, H2SO4 (0,5 mólegyenértéknyi mennyiség alkalmazása esetén a szulfát, 1 mólegyenértéknyi mennyiség alakalmazása esetén a hidrogén-szulfát képződik), CH3SO3H és P-CH3C6H4SO3H. A savaddíciós sókat ugyanúgy különítjük el, mint a kationos sókat. Az előbbiekben meghatározott (I) általános képlett! vegyületek könnyen adaptálhatók az antidiabetikus szerként való klinikai alkalmazáshoz. A klinikai felhasználáshoz szükséges aktivitást a hipoglikémiás hatás kimutatására szolgáló teszttel határozzuk meg, ob/ob egerekben, a következő eljárás szerint. 5-5 db, nyolc hetes C57 BL/6J-ob/ob egeret (Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine) egy-egy ketrecben helyeztünk el, a szokásos állattartási gyakorlatnak megfelelően. 1 hetes akklimatizációs periódus után az állatokat lemérjük és bármilyen kezelést megelőzőén 25 p.1 vért veszünk a szemből. A vérmintát azonnal hígítjuk - 1:5 arányban, olyan sóoldattal, amely 2,5 mg/ml nátrium-fluoridot és 2 % nátrium-heparint tartalmaz - és a metabolit-elemzésig jégen tartjuk. Ezután az állatoknak 5 napon át, naponta 5-50 mg/kg mennyiségben gyógyszert, ill. egy pozitív kontrollcsoportnak 50 mg/kg ciglitazont (Sohda és társai 4 461 902 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás; Chem.Pharm.Bull., vol. 32, p. 4460- 4465, 1984) vagy vivőanyagot adunk. Valamennyi gyógyszert 0,25 tömeg/térf.% metil-cellulózban mint vivőanyagban visszük be. Az 5. napon az állatokat újra lemérjük és szemen keresztül elvéreztetjük, a vér-metabolit-szintek meghatározására. A frissen levett mintákat 2 percen át szobahőmérsékleten 10 000 g sebességgel centrifugáljuk. A felülúszóban a glükózt pl. az ABA Bichromatic Analyzer (az Abbot Laboratories, Diagnostic Division lajstromozott védjegye; Pasadena, Kalifornia, Amerikai Egyesült Államok) segítségével határozzuk meg. Ennek során az A-gent (ugyancsak az említett Abbot Laboratories lajstromozott védjegye) alkalmazzuk, glükóz-UV-reagens-rendszerrel (hexokináz-módszer), 20, 60 és 100 mg/dl-es standard-ekkel. Ez Richterich és Dauwalder módszere (Schweiz.Med.Wochenschrift, vol. 101, 860, 1971) módosításának tekinthető. A plazma-glükóz-koncentrációt a következő egyenlet szerint határozzuk meg: mintaértékű*1,67-8,35•mintaérték (mg/dl). Ebben 5 a higítási tényező és 1,67 a plazma hematokrit-értékének megfelelő korrekció (feltételezve, hogy a hematokrit-érték 40 %). Azoknak az állatoknak az esetében, amelyek vivőanyagot kaptak, lényegében változatlanok maradnak a hiperglikémiás glukóz-szintek (pl. 250 mg/dl), míg a pozitív kontrollt képviselő állatok glukózszintje csökkent (pl. 130 mg/dl). A vizsgálandó vegyületeket a glükózszint normalizálásval (%) jellemezzük. 100 %-nak tekintjük azt a glükózszintet, amely ugyanakkora, mint a pozitív kontrolié (azaz 130 mg/dl); 50 %-os az a glukózszint, amely a vivőanyag-kontroll és a pozitív kontroll közötti különbség felének felel meg (azaz 190mg/dl) és 125 %-os az a glukózszint-csökkenés, amelynek során a szint 1,25-ször nagyobb mértékben csökken, mint a pozitív kontroll esetében (azaz 100 mg/dl) stb. Az (I) általános képletű vegyületek 10 mg/kg dózisban jellegzetesen 21-127 %-os glükózszint-normalizálódást mutatnak; az aktívabb vegyületek a 71-127 % tartományban helyezkednek el. így pl. azok az optikailag aktív 2R/5R (I) általános képletű vegyületek, amelyekben Rb jelentése m-klór-fenil-csoport, Ra jelentése -CH3 és Y jelentése (2’) általános képletű csoport vagy -CONHCH2- CONH2 csoport, 10 mg/kg dózisban egyaránt 100 %-os glükózszintnormalizálást idéznek elő. Az ok az (I) általános képletű racém RR/SS vegyületek, amelyekben Rb jelentése m-klór-fenil-, p-klór-fenil- vagy p-fluorfenil-csoport, Ra jelentése -CH3 és Y jelentése (2), (3’) általános képletű csoport vagy -CO- NHCH2CONH2 csoport, általában az aktívabb tartományban (71-127 %) helyezkednek el 10 mg/kg dózisban. Következtetésünket, amely szerint a találmány szerinti vegyületek egyben értékes koleszterinszint-csökkentő tulajdonságokkal is rendelkeznek, a következő vizsgálatra alapozzuk, amelynek során a 21. példa termékét, a racém RR/SS 2-(4-{2-[5-(3-klór-fenil)-oxazolidin-2-on-3-il]-propil)-fenil)-5-(trifluor-acetil-ami no)-oxazolt alkalmazzuk. A Jackson Laboratories-ből beszerzett C57BR/cd J törzsből száramzó egereket (koruk 6-12 hét) használunk fel, a laboratóriumban való 2-4 hetes akklimatizációs periódus után, amelynek során az állatok ad libitum kapnak vizet és standard laboratóriumi tápanyagokat. Az állatokat véletlenszerűen 3, 6-8 állatból álló csoportba osztjuk. Az egyik csoportot a standard laboratóriumi diétán tartjuk. A fennmaradó két csoport a következő összetételű tápanyagokat kapja: 18 napon át 0,75 % koleszterin 31 % szacharóz 15.5 % keményítő 20 % kazein 17% cellulóz 4.5 % kukoricaolaj 5 % kókuszdióolaj 0,25 % kólsav 4 % só és 2 % vitamin keverékét, majd az utolsó 5 nap folyamán délelőtt 9-11 óra között szondán keresztül a kontrollcsoportnak 5 ml/kg vivőanyagot (0,25 % metil-cellulóz), a vizsgálandó csoportnak pedig a vivőanyagban 20 mg/kg gyógyszert, naponta adunk be. Az adagolás 4. napja után az állatokat - délután 5 órától kezdve - egy éjjeleién át éheztetjük. A követ5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
