203283. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hatóanyagként dibenzazepinon-származékokat tartalmazó, akut és krónikus, obstruktív légzőszervi bántalmak kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására
HU 203283B 3 4 in vivo hatás patkányokon (p.g/kg, i.v.) Vegyület Fekélygátló hatás (Mi) ED70 Hörgőgörcsoldó hatás (M3) ED50 Nyálelválasztás gátlása (M3) ED50 Arány A 22 22 190 9 B 13 70 186 3 C 80 100 335 3 Az itt ismertetett broncholitikus hatások a muszkarinos receptorok szelektív blokádjára vezethetők vissza, amelyek a légutak simaizomzatán vannak lokalizálva. Ezeket a muszkarinos receptorokat Msmreceptoroknak is nevezik. A fent említett A, B és C vegyületek és enantiomerjeik, elsősorban a D vegyület, receptor-kötési kísérletekben kifejezett Mi-szelektivitást mutatnak. Az Mi-receptorok a paraszimpatikus idegducokban vannak lokalizálva, amelyek posztganglionáris neuronjai a légutak simaizomzatát látják el. Ezeknek az Mi-receptoroknak a blokádja a pre- és posztganglionáris neuronok izgalomátvitelét gátolja, ami a vagálisan előidézett bronciális tónus csökkenéséhez vagy a reflex-hörgőszűkület gátlásához vezet. így a fenti vegyületek M i -receptor-blokáddal előidézett hatásai jelentősen hozzájárulnak az obstruktiv légzőszervi megbetegedések kezelésének hatásosságához. A légutak MMS-receptorai blokádjának és a ganglionáris Mi -receptorok blokádjának ez a kombinálása nagyobb hatást eredményez, és ezzel új terápiás perspektívákat nyit meg a krónikus és akut légzőszervi megbetegedések kezelésében. Az alábbi kísérletek az A, B, C és D vegyületek előnyös tulajdonságait mutatják. A. Kötési kísérletek muszkarinos receptorokkor Az ICso-érték meghatározása in vitro A szerveket 180-220 g testtömegű hím Sprague- Dawley patkányok szolgáltatták. A szív, a szubmandibularis és a nagyagykéreg kivétele után valamennyi műveletet jéghideg Hepes-HCl pufferban (pH-7,4; lOOmmólosNaCl, 10 mmólosMgCte) végeztük. Ateljes szivet felaprítottuk ollóval. Ezután a szerveket egy-egy edényben homogenizáltuk. A kötési kísérlethez a szervhomogenizátumokat a következőképpen hígítottuk (térfVtérf.): 15 20 25 30 35 teljes szív 1:400 nagykéreg 1:500 szubmandibuláris 1:400 A szervhomogenizátumokat meghatározott radioligandum-koncentráció mellett és a nem-radioaktív kísérleti vegyületek koncentrációsorozataival Eppendorf centrifugacsövekben 30 °C-on inkubáltuk. Az inkubálás időtartama 45 perc volt. Radioligandumként 0,3 nmólos 3H-N-metil-szkopolamint pH-NMS, szív és szubmandibuláris) vagy 1 nmólos 3H-pirenzepint (3H-PZ, agykéreg) használtunk. Az inkubálás után jéghideg puffert adtunk a keverékhez és vákuumban megszűrtük. A szűrletet hideg pufferral leöblítettük és radioaktivitását meghatároztuk. Ez a 3H-NMS, illetve a 3H-PZ specifikus és nem-specifikus kötésének az összegét képviseli. A nem-specifikus kötés az a radioaktivitás, amely 1 pjnólos kinuklidin-benzüát jelenlétében megkötődik. Mindig négy meghatározást végeztünk. A nemjelzett kísérleti vegyületek ICso-értékeit grafikusan határoztuk meg. Ez az érték a kísérleti vegyületnek azt a koncentrációját jelenti, amelynél a n-NMS, illetve a 3H-PZ specifikus kötése a különböző szervek muszkarinos receptorain 50%-ban gátolva van. Az eredményeket az I. táblázat szemlélteti. B. A hörgőkre, a hólyagra és a szív/rekvenciára gyakorolt acetilkolin-hatás gátlása 40 Narkotizált tengerimalacoknak beadtuk a kísérleti vegyületeket, majd 5 perc múlva intravénásán és egyidejűleg intraartériásan 10 p.g/kgacetilkolint injekcióztunk az állatokba. Eközben a szívfrekvenciát az EKG-nak a test felületéről végzett mérésével, a 45 kilégzési ellenállást konzett-Rössler szerint és a szabaddá tett húgyhólyag összehúzódását közvetlenül regisztráltuk. A vizsgált szervekben az acetilkolinhatás gátlására dózis/hatás-görbéket vettünk fel, és ezekből a -log ED50- értékeket meghatároztuk. Az 50 eredményeket a II. táblázat szemlélteti. I. táblázat Receptor-kötési kísérletek, in vitro Vegyület 3H-PZ Agykéreg (Mi) IC 50 (nmól 11D) 3H-NMS Szív (M2) 3H-NMS Szubmandibuláris (M3) Atropin i,0 3,0 2,0 A 6,0 400 70 B 2,5 42 13 r 8,0 800 100 D 3,0 300 50 3
