203278. lajstromszámú szabadalom • Eljárás liposzóma készítmények előállítására
HU 203278B roil-etil-taurint (SMT) adunk. Az SMT oldhatatlan, de gyorsan oldódik micella képződés közben a Krafft pont feletti hőmérsékleten. Ekkor ezt az oldatot a fenti foszfolipid oldathoz adagoljuk és laboratóriumi ultrahangos készülékkel (Ohtake, Japan) v/o típusú emulziót képezünk. Az ultrahangos kezelést 50 watt teljesítmény mellett 3 np-ig végezzük, ötször ismételve. A kapott emulziót ezután forgó bepárlóba tesszük és az oldószert csökkentett nyomáson 60 °C hőmérsékleten elpárologtatjuk, így REV- et nyerünk. A párologtatás elején a nyomást erősen lecsökkentjük, majd később úgy állítjuk be, hogy a buborékképződést elkerüljük. A REV-ben visszamaradó kevés szerves oldószert nitrogén-átfúvással távolítjuk el. Ezután annyi fiziológiás sóoldatot adunk a REV-hez, hogy a térfogata 10 ml legyen, majd 1,2 mikronos szűrőn (Acrodisc, Gelman) átszűrjük és fiziológiás sóoldattal szemben dializáljuk (Spectrapor, Spectrum Medical) 24 órán át. A kapott, 6-CF-et magában foglaló liposzóma készítményben a 6-CF mennyisége 33,2%, amelyet a következőképpen határoztunk meg: 0,1 ml liposzóma készítményt foszfáttal pufferolt fiziológiás sóoldattal (PBS, pH- 7,2) 100-szoros mennyiségre hígítottunk, majd ismét 100-szoros hígítást végeztünk 0,02% TritonX 100-at tartalmazó PBS-sel, majd 60 °C-on 30 percig melegítettük, a liposzóma megbontására. A liposzóma szuszpenzióban lévő 6-CF teljes mennyiségét fluoreszcencia méréssel határoztuk meg (Hitachi, F3000 Fluorospectrometer, extinkciós hullámhossz 494 nm, mérési hullámhossz 515 nm). Külön készítettünk 0,1 ml liposzóma készítményből PBS-sel 1000-szeres hígítású oldatot, ennek 2,5 ml-ét centrifugálisan szűrtük (Centrisart, SM13249E, Sartorius), és a nem befoglalt szabad 6-CF mennyiségét a szuszpenzióban a szűrletből fluoreszcenciás vizsgálattal határoztuk meg. A befoglalt mennyiség - 100 x (a 6-CF teljes mennyisége) - (a szabad 6-CF mennyisége) / a liposzoma előállításához felhasznált 6-CF mennyisége 2. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak 30 mg SMT helyett 150 mg SMF-t használunk. A készítmény 34,9% 6-CF-et tartalmaz kötve. 3. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 30 mg SMT helyett 45 mg SMT-t használunk. A liposzóma 39,4% 6-CF-et tartalmaz. 4. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 30 mg SMT helyett 60 mg SMT-t használunk a liposzóma 46,3% 6-CF-et tartalmaz kötve. 5. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 30 mg SMT helyett 30 mg nátrium-palmiíoil-metiJ- taurint (PMT) alkalmazunk. A liposzóma 32,8% 6- CF-et tartalmaz kötve. 6. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 7 30 mg SMT helyett 30 mg oktadekán-szulfonátot (ODS) alkalmazunk. A liposzóma 33,3% 6-CF-et tartalmaz kötve. 7. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 30 mg SMT helyett 15 mg ODS-t alkalmazunk. A liposzóma 24,1% 6-CF-et tartalmaz. 8. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 30 mg SMT helyett 45 mg ODS-t használunk. A liposzóma 38,3% 6-CF-et tartalmaz. 9. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 30 mg SMT helyett 60 mg ODS-t használunk. A liposzóma 40,1% 6-CF-et tartalmaz. 10. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak 210 mg OPPC-t és 90 mg DSPC-t használunk a 270 mg DPPC és 30 mg DSPC helyett. A liposzóm a24,l% 6-CF-et tartalmaz. 11. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 270 mg DPPC helyett 300 mg DPPC-t használunk. A liposzóma 35,2% 6-CF-et tartalmaz. 12. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 270 mg DPPC és 30 mg DSPC helyett 210 mg DPPC-t és 90 mg DSPC-t használunk. A liposzóma 28,3% 6-CF-et tartalmaz. 13. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 270 mg DPPC helyett 300 mg DPPC-t használunk. A liposzóma 34,6% 6-CF-et tartalmaz. 14. példa Az 1. példában leírtak szerint járunk el, csak a 30 mg SMT helyett 30 mg nátrium-palmitoil-taurint használunk. A liposzóma 22,4% 6-CF-et tartalmaz. 15. példa 360 mg DPPC-t és 40 mg DSPC-t feloldunk 40 ml kloroformban. A szerves oldószert forgó párologtatóban eltávolítjuk, amikoris a lombik falán lipidfilm képződik. A filmben lévő oldószemyomatokat nitrogéngáz-fúvatással eltávolítjuk. A kapott filmhez ezután 10 ml 6-CF-et és 40 mg SMT-t tartalmazó oldatot (1. példa szerint előállítva és 60 °C-ra melegítve) adagolunk, 60 *C hőmérsékleten diszpergáljuk, amikoris MLV-t nyerünk. A kapott MLV-t ezután 50 watt teljesítménnyel 10 percig ultrahanggal kezeljük, így SUV-t nyerünk. Ezután az 1. példában leírtak szerint a készítményt szűrjük, dializáljuk, amikoris 5,7% 6-CF-tartalmú liposzóma készítményt nyerünk. 16. példa A15. példa szerint járunk el, csak 280 mg DPPC-8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
