203278. lajstromszámú szabadalom • Eljárás liposzóma készítmények előállítására
HU 203278B pidekből ismert módon szuszpenziót vagy emulziót kpezünk. Például a REV, MLV, SUV vagy más liposzómák előállításnál ismét eljárást alkalmazzuk, és például a következők szerint járunk el: a foszfolipidet először szerves oldószerben (például dietil-éter, izopropil-éter, kloroform, vagy ezek bármilyen elegye) oldjuk, ehhez hozzáadjuk a fentiek szerint nyert vizes oldatot és v/o típusú emulziót állítunk elő. Az így kapott v/o emulzióból a liposzóma készítményt például a következő irodalmi helyeken leírtak szerint nyerjük: Proc. Natl. Acad. Scl. USA, 75, 4194 (1978) és Gazetta of Japanese Unexamined Patent Publication No. 118415/1980. A felhasznált szerves oldószer mennyisége általában 2-10-szerese a befoglalni kívánt folyadéknak. A foszfolipid mennyisége 10-100 pjnól per 1 ml befoglalni kívánt folyadék és általában előnyös, ha a foszfolipidet az oldószerben előzőleg oldjuk. A v/o emulziókat általában keveréssel, nyomás alatti kezeléssel vagy ultrahangos kezeléssel nyerjük. homogén emulziót nyerünk például 20 KHz-es teljesítményű ultrahangos berendezéssel 1-20 percig végzett kezeléssel. A találmány szerinti eljárásnál alkalmazott anionos felületaktív anyagokkal homogén és finomeloszlású emulziót nyerhetünk. A kapott v/o emulzióból ezután az oldószert ismert módon eltávolítjuk. Az eltávolításhoz alkalmazhatunk például forgó bepárló berendezést. A párologtatást 40 °C-on vagy e fölött végezzük a kezdeti lépésben 60-400 Hgmm, majd a gélképződés megindulásakor 100-700 Hgmm nyomáson. A további párologtatás során nyerjük a REV (reverse phase vesicle) liposzóma készítményt. Az így előállított liposzóma ey- vagy oligo-lamellás (általában 10 vagy kevesebb rétegből álló lipid kettős membrán), a hatóanyagot is magában foglaló liposzóma. A multi-lamellás hólyag-típusú liposzóma készítményeket (MLV) úy nyerjük, hogy a fentiek szerint nyert szerves oldószerből és foszfolipidből álló oldatból az oldószert elpárologtatjuk, amikoris a foszfolipidet vékony film formájában nyerjük, ehhez hozzáadjuk a hatóanyagot és anionos felületaktív anyagot tartalmazó vizes oldatot és 40 ’C-on vagy e fölött diszpergáljuk. Az így kapott MLV készítményt laboratóriumi ultrahangos készülékben rázatva kis unilamellás szerkezetű (SUV) liposzóma készítményt nyerünk. A találmány szerinti eljárást a stabil, több-lamellás hólyag (stable plurilamellar vesicle, SPLV) módszerhez (Gazetta of Japanese Unexamined Patent Publication No. 500952/1984) és a dehidrációs-rehidrációs hólyag módszerhez (C. Kirby és munkatársai Biotechnology, nov. 979, 1984) is alkalmazhatjuk. Ha a hatóanyag zsírban jól és vízben csak kissé oldódik a liposzóma készítményt úgy nyerjük, hogy a hatóanyagot valamely fenti oldószerben oldott lipidben oldjuk. Az ilyen liposzóma készítményt közvetlenül is felhasználhatjuk, vagy szükség esetén a kívánt részecskeméretűre alakítjuk, például megfelelő pórusméretű szűrőn való szűréssel vagy gélszűrésscl. Felhasználás előtt előnyös, ha a szabad, nem liposzóma szerkezetben foglalt hatóanyagot eltávolítjuk, így például gélszüréssel, centrifugálással vagy dialízissel. A találmány szerinti eljárással előállítható lipo-5 szórna készítményeknél a hatóanyag bármilyen lehet, így például lehetnek tumor-ellenes szerek, például platina vegyületek, például cisplatin, carboplatin, spiroplatin, továbbá adriamicin, mitomicin C, aetinomicin, ansamitomicin, bleomicin, 5-FU és metotrexát, továbbá lymphokeinek, így például természetes vagy gén rekombináns interferonok (a, ß, y) és természetes és gén rekombináns interleukinok, fiziológiailag aktív peptidek, így például mangánszuper-oxid dezmutáz (SÓD) és ezek származékai, szuperoxid dezmutáz PEG (PEG-500) (Gazetta of Japanese Unexamined Patent Publication No. 16685/1982 és 0210761. számú európai szabadalmi bejelentés); béta-laktám antibiotikumok, így például gentamicin, streptomicin, kanamicin; vitaminok, így például cianocobalamin és ubiquinon anti-protazoális szerek, így például meglumin-antimonát; enzimek, így például alkil-foszfatáz; antikoagulánsok, így például heparin; antiallergiás szerek, így például amlexanox,; immun aktiváló szerek, így például muramii dipeptid és TMD-66 [Cancer, Gann 74 (2) 192-195, 1983]; keringési rendszerre ható szerek, így például propanolol; metabolizmust aktiváló szerek, így például glitatoin. A találmány szerinti eljárásnál előnyösen vízben oldható hatóanyagokat alkalmazunk, ezeket úgy jellemezzük, hogy az oktanoi és víz közötti megoszlási koefficiensük logaritmusa kisebb mint 10 vagy egyenlő mint 10. A találmány szerinti eljárással előállított liposzóma készítményeket intravénásán injekció vagy infúzió formájában alkalmazzuk. Infúziónál a megfelelő mennyiségű oldatot vagy emulziót fiziológiás sóoldatban szuszpendáljuk. A találmány szerinti eljárással előállított liposzóma készítmények a vérrel hosszú időn keresztül képesek keringeni a szervezetben az intravénás adagolást követően, így csökkentik a hatóanyag toxieitását és fokozzák a hatóanyag irányítottságát a kívánt szövethez és növelik annak hatásosságát. Különösen az anti-tumor-ellenes hatású hatóanyagot tartalmazó készítmények esetében várható a megnövekedett hatás rendellenes magas láznál való adagolás esetén. Ilyen esetekben olyan liposzóma készítményeket alkalmazunk, amelyekben a liposzóma membrán fázis átmenet hőmérséklete 40-55 °C közötti érték. Ábrák rövid ismertetése: Az 1., 2. és 3. ábrán a 6-CFhatóanyagot tartalmazó liposzóma készítmények intravénás adagolása után a vérben mért 6-CF szinteket ábrázoltuk az idő függvényében, patkányok esetében. A 4. ábrán a 6- CF vagy CDDP tartalmú liposzóma készítmények vérszintjét ábrázoltuk az idő függvényében. A vérszintet a dózis %-ában adjuk meg, feltételezve, hogy a vér térfogata 10%-a a testtömegnek. A következő példákkal a találmányt közelebbről mutatjuk be. 1. példa 270 mg DPPC-t és 30 mg DSPC-t feloldunk kloroform és izopropil-éter 1:1 arányú clegyében. 10 ml 6-karboxi-fluoresceint (6-CF) tartalmazó vizes oldathoz, amelyet úgy állítottunk elő, hogy az ozmózisos nyomása a fiziológiás sóoldatéval azonos legyen, szobahőmérsékleten 30 mg nátrium-sztea-6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
