203242. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid vegyületek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint nematocid készítmények
1 HU 203 242 B 2 6. példa 5-Dezoxi-23-etoxi-A faktor előállítása 61 mg 5-dezoxi-A faktor, 474 mg ezüst-karbonát, 0,16 ml etü-jodid és 356 mg ezüst-perklorát 8 ml száraz dietü-éterben készült elegyét szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. Az elegyet ezután Kieselguhr párnán szűrjük, száraz dietü-éterrel mossuk, és az egyesített szűrleteket és mosófolyadékokat 1,5 ml kollidinnel és 1 ml metanollal keverjük. 1 óra elteltével az oldatot vízzel, 2 n hidrogén-kloríddal majd NaQ-oldattal mossuk. A szerves fázist szárítjuk, majd bepároljuk. A visszamaradó habot preparatív nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással tisztítjuk, és az eluátumot bepároljuk. így 18 mg cím szerinti terméket kapunk fehér hab formájában. [aj n+182° (c=0,5, CHC13) X»?H244,8nm(emax 28,000) IR (CHBr3) 3490 (OH) és 1704 cm'1 (lakton) NMR 8 (CDa3) többek között 0,76 (d, 6Hz; 3H), 0,94 (d, 6Hz; 3H), 0,99 (d, 6Hz; 3H), 1,04 (d, 6Hz; 3H), 1,14 (t, 7Hz; 3H), 1,75 (s; 3H), 3,08 (m; 1H), 3,26 (m; 1H), 3,64 (m; 1H), 3,47 (q, 3Hz; 1H) és 5,2-5,5 (m; 3H). Az 5. példa szerint előállított vegyület minimális gátló koncentrációja 0,015 pg/ml szabadon élő C. elegáns esetén ugyanennek a vegyületnek az aktivitása 10 mg/kg szubkután adagolás mellett 30%, 2 mg/kg perorális adagolás mellett 79%. A fenti eredményeket az alábbi vizsgálati eljárásokkal határoztuk meg. Egér szkrineléses vizsgálat 18-20 g testtömegű nőstény egereket (Manor White Swiss) 20 Nematospiroides dubius lárvával fertőzünk be. A lárvákkal való befertőzést követően három hét múlva az egereket orálisan, gyomorszondán át a vizsgálandó vegyület egyszeri dózisával kezeljük. A kezdeti vizsgálati dózis 1000 mg/kg. A vegyületeket Vortex keverőben üveggyöngyök alkalmazásával pontjuk, majd 0,2%-os agarban oldjuk vagy szuszpendáljuk. Az oldatból vagy szuszpenzióból 0,5 ml-t adunk be orálisan egy-egy egérnek. A kezelést követő harmadik napon az egereket leöljük és felboncoljuk, az egyenként 4 egérből álló kezelt csoportok állataiban talált átlagos N. dubius számot statisztikusan a 20 kezeletlen állatból álló kontrollcsoportban talált átlagos N. dubius számhoz hasonlítjuk. Caenorhabditis elegáns elleni hatás szkrinelése A vizsgálandó vegyületekből 300 ppm-es oldatot készítünk vizes acetonban. Az egyes vegyületek oldatából 25 pj-es alikvot részt 96 lyukú lemezre viszünk. Az oldószert elpárologtatjuk és a lemezt a vizsgálathoz való alkalmazás előtt egy hétig tároljuk. A mikrotiter-lemez egy-egy lyukába 50 pj, mintegy 25 kifejlett C. elegáns tartalmú oldatot adunk. A lemezeket szobahőmérsékleten tároljuk, és 4 és 24 óra múlva leolvassuk. Ha a 24 óra elteltével teljes mortalitást észlelünk, a vegyületet további vizsgálatra érdemesnek tartjuk, és in vivo rágcsáló-modellben folytatjuk a vizsgálatot. Ha a teljes mortalitásnál kisebb aktivitást észlelünk, a vegyületet aktívként jelöljük meg, de az üyen vegyületek érdeklődésre nem tarthatnak számot. Ha hatást nem észlelünk, a vegyületet inaktívnak nyüvánítjuk. A következőkben a találmány szerint előállított vegyületeket tartalmazó készítmények formálását mutatjuk be példákban. „Hatóanyag” megjelölésen az 1. példa szerint előállított vegyületet értjük. A példákban szereplő „tartomány” megjelölés azt jelenti, hogy az egy megadott összetételű készítményen kívül azonos összetevőkből, a segédanyagok mennyiségének arányos változtatásával a megjelölt hatóanyagtartalmú készítmények is előállíthatok. Többdózisú parenterális injekció készítése 1. Formálási példa tömeg/térf.% tartomány Hatóanyag 2,0 0,1 -6,0. Benzü-alkohol 1,0 tömeg/térf.% Poliszorbát 80 10,0 Glicerin-formái* 50,0 Injekciós minőségű víz kiegészítésül 100,00%-ra ‘Glicerin formaldehid gyűrűs kondenzációs terméke. A hatóanyagot a poliszorbát 80-ban és a glicerinformálban oldjuk. Az oldathoz hozzáadjuk a benzüalkoholt, és térfogatát a kívánt értékre egészítjük ki injekciós minőségű vízzel. A terméket szokásos módon sterilezzük, például sterilre szűrjük vagy autoklávban hővel sterilezzük, majd aszeptikusán szereljük ki. 2. Formálási példa tömeg/térf.% tartomány Hatóanyag 4,0 0,1-7,5 tömeg/térf.% Benzü-alkohol 2,0 Glicerin-triacetát 30,0 Propüénglikol kiegészítésül 100,0%-ra A hatóanyagot a benzü-alkoholban és a glicerin-triacetátban oldjuk. Az oldathoz hozzáadjuk a propflénglikolt a kívánt térfogat eléréséig. A terméket gyógyászatban szokásos eljárással sterilezzük, például sterilre szűrjük, majd aszeptikusán szereljük ki. 3. Formálási példa % tartomány Hatóanyag 2,0 tömeg/ 0,1 -7,5 tömeg/ térf.% térf.% Etanol 36,0 Nemionos felületaktív szer (pl.SynperonicPEL44*) 10,0 Propüénglikol kiegészítésül 100,0 ml-re *Az ICI cég védjegye 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 9
