203240. lajstromszámú szabadalom • Új makrolid vegyületeket tartalmazó nematocid és akaricid készítmények és eljárás új makrolid vegyületek és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 240 B 2 létén egymást követően 20 mg, 0,29 mmól imidazolt és 20 mg, 0,24 mmól metoxi-amin-hidrogén-kloridot adunk, és az elegyet 1 órán át keverjük. Az elegyhez 16 mg, 0,42 mmól nátrium-bór-hidridet adunk, és további 20 percen át keverjük. A reakciót víz hozzáadásával leállítjuk, az elegyet dietü-éterrel extraháljuk, és az éteres fázist magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, majd vákuumban besűrítjük. A visszamaradó anyagot szilikagél oszlopon kromatografálva tisztítjuk, eluensként heptán és diklór-metán elegyét alkalmazzuk. így 18%-os hozammal 9,5 mg cím szerinti vegyületet nyerünk beige színű hab formájában. 13C-NMR 173,4, 155,8, 140,1, 138,9, 138,0, 130,4, 123,8, 123,4, 120,2, 118,1, 98,7, 83,4, 81,9, 80.3.79.4.68.5.68.2.68.0. 67.9.67.7.61.4.45.8.41.9, 40.8.37.5.36.1.35.6.34.4.27.0. 22.9.20.1.19.0.11.1 ppm. A 4. példa szerint előállított (13R)-hidroxi-23-(0- metü-oxim)-A-faktor Trichostrongylus colubriformis (birka-parazita-nematóda) ellen 0,125 pg/kg koncentrációban alkalmazva 98% aktivitású, Proroptes cuniculi (nyúl-parazita, atka) ellen 4 pg/ml koncentrációban 76% aktivitású. A fenti eredményeket az alábbi vizsgálati eljárások Trichostrongylus colubriformis A vizsgálatokban 5 hetes hím egereket (Gerbillus) fertőzünk meg a 0. napon 400-600 birka eredetű fertőző T. colubriformis lárvával. A 7. napon az egereket megmérjük, és a kezelést megkezdjük. Az egereket a 11. napon leöljük, és megszámoljuk a megmaradt férgeket. A hatékonyságot százalékos értékben fejezzük ki a kezelt állatokban lévő féregszám és a kezeletlen, fertőzött kontroliban lévő féregszám alábbi képlet szerinti összehasonlításával. A vizsgálatok értékelését kezelésenként 3 párhuzamos alapján végezzük ühatékonysíg- Ko°t°niUag-toeltátlag kontroll atlag A vizsgálatokhoz a hatóanyagot polietüénglikol és dimetü-szulfoxid (PEGDMSO) 1:2 térfogatarányű elegyében oldjuk annyi oldószert alkalmazunk, hogy a hatóanyagot az állatoknak 0,0313-0,1250 mg/testtömeg kg dózisban adjuk be. Psoroptes cuniculi - száraz szűrőpapír teszt Anyagok Polisztirolból készült eldobható Petri csészék 35 x 100 mm, Falcon 1008 Szűrőpapír, Whatman 934-AH, üveg mikroszál 3,7 és 3,5 cm Aceton, reagens minőségű Vazelin 3 mm-es szilárd üveggyöngyök Különféle pipetták Nagy kerámia lemezek vagy ezek megfelelői Nyúl donorból gyűjtött fül-atka Módszerek A vizsgálandó hatóanyagok előkészítése A vizsgálatot megelőző napon vagy a vizsgálat reggelén a hatóanyagokat acetonban feloldjuk és a kívánt koncentrációra hígítjuk A koncentrációkat úgy számítjuk, hogy 400 pl oldat tartalmazza az egy szűrőpapírra felvinni kívánt mennyiséget. Az oldatból 400 jxl-t pipettázunk egy 3,7 cm átmérőjű felső és egy 3,5 cm-es átmérőjű alsó szűrőpapír korongra, és ezeket kerámia lemezre helyezzük száradni. Megjegyezzük hogy ezt a műveletet fülke alatt végezzük A szűrőpapír egyik oldala sima, a másik durva. A hatóanyagot a durva oldalra visszük ezt az oldalt száradáskor felfelé helyezzük el. A korongokat száradás után durva felükkel egymásra borítva Petri csészébe helyezzük egymástól egy 3 mm-es üveggyönggyel elválasztva. A csészéket - amennyiben előző nap készítettük el - éjszakán át szobahőmérsékleten tartjuk. 0,01,0,1 és 1,0 pg/1 cm2 CL 301 423-t alkalmazunk minden vizsgálatban standardként. Atkák összegyűjtése és adagolása A vizsgálat reggelén fertőzött nyulak füléből atkákat tartalmazó varat gyűjtünk. Ezt az anyagot nagy Petri csészébe helyezzük megvilágított nagyító alá. Az atkák kimásznak a varból, és boncolótű hegyén vagy finom csipesz egyik ágának végén könnyen összegyűjthetők. Az egyes Petri csészékben lévő felső szűrőpapírt eltávolítjuk, az alsó szűrőpapírra 12 atkát helyezünk, majd a felsőt visszahelyezzük A Petri csésze fedelének visszahelyezése előtt a csésze peremét vazelinnel bekenjük hogy az atkáknak a csészéből való menekülését megakadályozzuk. A vizsgálatokat általában dózisonként 4 párhuzamos mintán végezzük, amelyek közül kettőt 4 óra, kettőt 24 óra elteltével értékelünk az atkák megszámolásával. Az atkáknak a Petri csészébe a fenti módon történő behelyezését követően a párhuzamos mintákat egy tálcára helyezzük, majd a tálcát néhány nedves törülközővel együtt műanyag zacskóba tesszük, és szobahőmérsékleten tároljuk. A kezelt atkák értékelését az alábbi módon végezzük 1. A csészét óvatosan kinyitjuk, a felső szűrőpapírt eltávolítjuk, és megőrizzük. 2. Az alsó szűrőpapírra puha ceruzával kis, mintegy 1/2 cm átmérőjű kört rajzolunk. 3. Eldobható pipettával enyhén megnedvesítjük a kör körüli felületet. 4. A csészében lévő minden atkát a körön belülre viszünk. Gondosan ellenőrizzük a csésze fedelét, a felső szűrőpapírt és az alsó szűrőpapír alatti részeket. 5. Megszámoljuk a körön belüli atkák számát, és a számot feljegyezzük 6. A csészére a fedelet visszahelyezzük, és a csészét félretesszük. 7. Legalább 15 perc elteltével megszámoljuk a körön belül maradt atkákat (ezek az elpusztult atkák). 8. Kiszámítjuk, és feljegyezzük az élő atkák számát. 9. Az elpusztult atkák százalékos mennyiségét az alábbi képlet alapján számítjuk ki: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
