203237. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tetrahidrofolsav-származékok biológiailag aktív izomerjének előállítására frakcionált kristályosítással
1 HU 203237 B 2 40 tömeg% között van, az oldószer és a kristályosítószer aránya pedig 10:1 és 1:1 között. A kristályosítószer esetén a savkoncentráció 0 és 12 n között változhat. Általában nagyobb kitermelést érhetünk el alacsonyabb elválasztási arány mellett, ha viszonylag sok kristályosítószert használunk; ha ellenben kevés a kristályosítószer, jobb az elválasztás, ugyanakkor a kitermelés csökkenhet. A kitűzött céltól, a mindenkori kiindulási anyagtól, oldó- és kristályosítószertől függően az optimális reakciófeltételek szisztematikus próbálkozással minden nehézség nélkül meghatározhatók. Ha egy [5,10-CH-(6RS)-THF]X.HX típusú savaddíciós sóból indulunk ki, a diasztereomer-elválasztás [5,10-CH-(6R)-THF]X.HX keletkezése közben frakcionált kristályosítással egy olyan oldószerből, mint például a hangyasav, víz hozzáadásával illetve bármüyen anyag hozzáadása nélkül is sikerülhet. Először általában a kívánt (6R)-vegyület kirstályosodik ki, a diasztereomer (6S)-vegyület a szűrletben dúsul fel. Egyes esetekben, pl. ha az 5,10-CH-(6RS)THF belső sóját hangyasav/víz rendszerből, vagy az [5,10-CH-(6RS)-THF].triklór-acetátot dimetü-szulfoxidból kristályosítjuk, ezzel szemben először a (6S)diasztereomer kristályosodik ki és a (6R)-diasztereomer a szűrletből izolálható. A találmány egy különösen előnyös kivitelézésénél folsavból formilezéssel kapott 10-formü-folsav katalitikus hidrogénezése és dehidratálása után nyert hangyasavas oldathoz, amely a (6RS)-I vegyületet in situ tartalmazza, egy erős vizes savat, például sósavat adunk, ezáltal a (6R)-diasztereomer az [5,10-CH(6R)-THFPCHX, például a megfelelő klorid-hidroklorid alakban kristályosítható ki. Ezen eljárás segítségével a (óS)-tetrahidrofolátok, különösen az 5-CHO-(6S)-THF és az 5-Me-(6S)-THF egyszerűen és rendkívül gazdaságosan hozzáférhetővé válnak. Mint fiziológiáséin jól tűrt sók, elsősorban a kalcium-, magnézium-, nátrium- és káliumsók jönnek számításba. A magnéziumsók, összehasonlítva a kalciumsókkal, elsősorban általánosan magasabb vízoldhatóságukkal tűnnek ki. Ez lehetővé teszi, hogy alkalmazásukkal szélesítsük a dózistartományt. Nem szükséges, hogy az 5,10-CH-(6R)-THF-at vagy savaddíciós sóit teljesen mentesítsük a kísérő (óS)-formától. A hidrolízissel, illetve redukcióval 5-CHO-(6S)-THF-vá, illetve 5-Me(óS)-THF-vá való átalakítás során ugyanis a „hibás” diasztereomer maradéka eliminálódik. Példákl. példa Kalcium-5-formil-(6S)-tetrahidrofolát előállítása 1.1. 5,10-Metin-(6RS)-tetrahidrofolsavfrakci-onált kristályosítása 1000 g [5,10-metin-(6RS)-tetrahidrofolsav]-kloridJndroklorid.dihidrát ([5,10-CH-(6RS)THFjClJía.2H20) 2 liter 35 °C-os hangyasavas oldatához 300 ml 2 n sósavat adunk, lassan 20 °C-ra hűtjük és kristályosodni hagyjuk. Néhány óra múlva a kivált terméket kiszűrjük és 2 n sósavval mossuk. (6R)-I vegyületet kapunk, 91,5%-os [5,10-CH-(6R)THFJC1.HC1 diasztereomer-tartalommal, királis oszloppal (Reservosil-BSA-7) elvégzett HPLC-analízis alapján. a o =+360 (c= 1 DMSO/2 n HC18:2 arányú keverékében) Optikai kitermelés: 79% A (6R- és 6S-) izomertartalom meghatározási módszere HPLC-analízissel: oszlop: Resolvosü BSA-7 (7 (jjn) oldószer: 0,15 mól NaH2P04 vízben, pH=4,5 átfolyási segesség: 2 ml/perc detektálás: 286 nm 1.2. Átalakítás kaicium-5-forrtál-(6Sptetrahidrofoláttá (transzformilezés) Az 1.1-ben kapott kristály 120 g-ját vizes nátronlúgban oldjuk, néhány órán át pH=5,5 és pH=6,5 között gyengén forraljuk, lehűtjük, majd telítjük kalcium-kloriddal. Az 5-CHO-(6S)-THF kristályosodó kalciumsóját vízből átkristályosítjuk. Ekkor 82 g kalcium-5-formil-(6S)-tetrahidrofolát.5H20-t kapunk. A kalcium-5-formil-(6S)-tetrahidrofolát-tartalom 99 felület%, királis oszloppal végzett HPLC-analízis alapján. aß =-15° (vízmentes Ca-sóra vonatkoztatva; c= 1,5; vízben) 2. példa 5-Metil-(6S)-tetrahidrofolsav és kalcium-5-metil-(6S)-tetrahidrofolát előállítása 2.1. Insitukapott 5,10-metin-(6RS)-tetraMdrofolsav frakcionált kristályosítása 1000 g folsavat hangyasavban oldva formüezünk, és éjszaka állni hagyjuk, majd atmoszferikus nyomáson és szobahőmérsékleten Pt-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátor leszűrése után kapott oldatot bepárlással 30-35%-osra töményítjükbe. A koncén trátumhoz egy tömegrészre számított 0,4 tömegrész tömény (35%-os) sósavat adunk 35 °C hőmérsékleten. Hagyjuk szobahőmérsékletre lehűlni, éjszaka 5-10 °C hőmérsékleten állni hagyjuk, a kivált kristályokat kiszűrjük és kevés jéghideg acetonos sósavval mossuk. [5,10-CH-(6R)-THF]Cl.HCl-ot kapunk, a (6R)-arány90%. Kitermelés: 388 g. 2.2. A nyers 5,10-metin-(6R)-tetrahidrofolsavklorid-hidroklorid átkristályosítása A 2.1. szerint kapott kristály 1,2 kg-ját 35 °C hőmérsékleten 3 liter hangyasavban oldjuk és 450 ml 2 n sósavat adunk hozzá, fokozatosan szobahőmérsékletre hűtjük és néhány órán át 5-10 °C-on tartjuk. A képződő kristályokat kiszűrjük és híg sósavas acetonnal mossuk. [5,10-CH-(6R)-THF]Cl.HC1.2H2O-t kapunk, a(6R)-arány98%. [a]j)=+38,4°(c=l; DMSO/2nHC18:2) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
