203205. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szterin liposzómák előállítására
1 HU 203 205 B 2 don háromszor mossuk. Az így kapott gömbök vörös színűek, ez jelzi az arzenazo IH beépülését. 1.1.5. Koleszterin-hemiszukcinát-trietanol-aminmultilamelláris-liposzómák 50 mg koleszterin-hemiszukcinát-trietanol-amin sót adunk 1 ml arzenazo ül oldathoz (a végső koncentráció 4,5 mM), 0,01 M trietanol-amin-HG (pH=7,3), 0,07 M KC1, 0,07 M NaCl pufferban. A koleszterinhemiszukcinát-multilamelláris liposzómák szuszpenzióját üveggyöngyökkel végzett örvénylő keveréssel képezzük. A fenti liposzómákat 15 percig centrifugálva (10 000 xg) gömböcskékké alakítjuk, és az így kapott gömböket a 6.1.1. fejezetben leírtak szerint háromszor mossuk. A gömbök vörös színűek, ez jelzi az arzenazo Hl beépülését. 1.1.6. Koleszterin-herrúszukcinát-miconazolemultilamelláris liposzómák A miconazole szabad bázisát a következőképpen készíthetjük el: nátrium-hidroxid vizes oldatával megtitráljuk a miconazole-nitrát éteres szuszpenzióját. Az éteres fázist elkülönítjük és az étert lepároljuk, ekkor a miconazole szabad bázist tartalmazó olaj marad vissza. Az olajat ezután koleszterin-hidrogén-szukcinátot tartalmazó etanolhoz adjuk. Az etanolt lepároljuk, így film marad vissza, ez a koleszterin-hemiszukcinát-miconazole sóból állt. Ezután a filmhez vizes oldatot, célszerűen 0,9%-os NaCl-oldatot adunk, és az elegyet alapos örvénylő keverésnek vetjük alá, így az oldatban vesiculák képződnek. 1.1.7. Koleszterin-hemiszukcinát kis unilamelláris liposzómák ultrahang kezeléssel előállítva Koleszterin-hemiszukcinát-multilamelláris liposzómákat készítünk az 1.1.1., 1.1.2., 1.1.3., 1.1.4.és 1.1.5.fejezetek szerint, de az arzenazo Dl vegyületet kihagyjuk. A végtermék liposzóma gömböcskéket újra szuszpcndáljuk annak a pufferaak 2 ml-ében, amelyben előállítottuk és ultrahanggal kezeltük (bath sonicator), amíg a tejszerű szuszpenzió kitisztul, jelezve, hogy a koleszterin hemiszukcinát-multilamelláris liposzómákat kis unilamelláris liposzómákká alakultak át. 1.1.8 Koleszterin-hemiszukcinát-kis unilamelláris liposzómák sajtolási technikákkal előállítva Koleszterin-hemiszukcinátot 10 mM HEPES-t /N2-2-hidroxi-etü-piperazin-N1 -2-etán-szulf onsavat) és 150 mM NaQ (pH=7,5) tartalmazó oldatban diszpergálunk, a koncentráció 100 mg/ml. Ezt az anyagot 30 nm-es „Nucleopore polycarbonate” szűrőn tízszer átsajtoljuk, így koleszlerin-hemiszukcinát-kis unilamelláris liposzómákat kapunk. 1.1.9. Miconazole-Koleszterin-hemiszukcináttrisz-krém 20,64 g koleszterin-hemiszukcinát-trisz(hidroxi-metil)-amino-metán sót (CHS-trisz) (a Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri gyártmánya) 206 ml forrásban lévő etanolban feloldunk. Amikor az etanolos CHS trisz-oldat tiszta lesz, a melegítést megszüntetjük és enyhe keverés közben 5,16 g miconazole bázist 103 ml etanolban hozzáadunk. A tiszta oldatot nagy, lapos tálba (24 x 243 x 18 mm) öntjük és rövid ideig nagy ultrahangkészülékben kezeljük, amíg a gélesedésmegkezdődik. A tálat ekkor szorosan lefedjük és a gélesedést 15 °C-on 4 órán át hagyjuk tökéletesen végbemenni. Ekkor a fedőt levesszük és az etanolt hagyjuk elpárologni. A megszárított gélt darabokra vágjuk, szilárd szén-dioxiddal keverőbe tesszük és addig őröljük, amíg finom granulált port kapunk. Az így kapott port steril, desztillált vízzel keverjük, amíg homogén krémet kapunk, amelynek végső térfogata 51,6 ml, a miconazole-koncentráció 100 mg/ml. Az eljárást megismételjük, 10,32 g miconazole-t használva, így olyan krémet kapunk, amelynek miconazole koncentrációja 200 mg/ml. További miconazole-CHS-trisz készítményeket állítunk elő a fent leírt műveletek szerint és a fenti anyagokkal, s így a következő összetételű termékeket kapjuk: Miconazole (mg) CHS-trisz (mg) Víz (mg) 50 100 850 100 200 700 100 400 400 200 400 500 1.1.10. Terconazole-CHS-trisz krém 2,0 g CHS-trisz sót 20 ml forrásban lévő etanolban feloldunk. Amikor az etanolos CHS-trisz-oldat tiszta lesz, megszüntetjük a melegítést és enyhe keverés közben 50 ml etanolban 1,0 g terconazole-t és 83 mg [L(+]-tejsavat 2 ml etanolban hozzáadunk. A tiszta oldatot széles szájú nagy edénybe öntjük és ultrahanggal kezeljük, amíg gélesedni kezd. Az edényt szorosan lefedjük és 4 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk, ekkor a gélesedés tökéletesen végbemegy. A fedőt levesszük és az etanolt levegőn, 25 °C-on hagyjuk elpárologni. A megszárított gélt darabokra vágjuk, szilárd széndioxiddal keverőbe tesszük és addig őröljük, amíg finom granulált port kapunk Ezt a port 10 ml vízzel keverjük, amely 6,3 g, ultrahanggal kezelt CHS-triszliposzómát tartalmaz. Az így kapott szuszpenziót desztillált steril vízzel addig keverjük, amíg 20,8 ml térfogatú homogén krémet kapunk, a tetraconazole tartalom 48 mg/ml krém. 1.1.11. Miconazole-CHS-trisz kúpok 400 mg CHS-trisz sót 4 ml forrásban lévő etanolban feloldunk Az oldathoz keverés közben 100 mg miconazole bázist adunk 1 ml etanolban és növényi zsiradékokból származó, 1,2 g tejsav-triglicerid megolvasztott kemény zsiradékot (Wecobee M, PVO Intemation Boonton, New Jersey). Az így kapott tiszta oldat aliquot mennyiségeit 1,5 ml-es polipropilén mikroformákba szétosztjuk, rövid ideig (körülbelül 60 mp-ig) ultrahanggal kezeljük, hogy a CHS-trisz sót gélesítsük, és 4 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, ezalatt 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10
