203205. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szterin liposzómák előállítására
1 HU 203 205 B 2 a gél megszilárdul. A polipropilén formát eltávolítjuk és a félig szilárd gélt a maradék etanol eltávolítása céljából éjszakára vákuum exszikkátorba tesszük. A fent leírt eljárással más miconazole-CHS-trisz kúpkészítményeket is előállítottunk, ezeket az alábbi táblázatban soroljuk fel. Micona-CHSWeco-Tejsav Tojás zole trisz beeM foszfokolin (mg) (mg) (mg) (mg) (mg) 3,4 6,8 80,3 3,4 13,6 20,5 ' 6,9 13,8 80,3 6,9 27,6 44,0 10,3 20,6 80,3 20,0 41,0 12,0 20,6 41,2 20,6 41,2 2,2 10,3 20,6 41,2 79,4 1.1.12. In vivo heads vaginalis Candida fenőzéseknél Patkányokat (Charles River Breeding Laboratories), amelyeknek petefészkét eltávolítottuk, gyenge bétaösztradiol-valerát kezelésben részesítve előidézzük a konstans ösztrusz állapotát (és a hajlamot a vaginális Candida fertőzésre). A patkányokat 5 x 106 egység (CFU) Candida albicans gombával intravaginálisan megfertőztük. A fertőzés után a harmadik naptól kezdve a megfertőzött patkányokat naponta kétszer, három napéul át intravaginálisan 2 tömeg/térfogat% miconazolenitrátot tartalmazó krémmel kezeljük, 12% miconazolenitrátot tartalmazó krémmel kezeljük az állatokat egyszer a fertőzés utáni harmadik napon vagy a találmány szerinti valamely CHS-trisz kúp- vagy krém-készítménnyel csupán egyszer, a fertőzés utáni harmadik napon. Kontroll patkányok nem kaptak kezelést. A fertőzés utáni hatodik vagy tizedik napon valamennyi patkányvagináját megvizsgáltuk Candida albicans-ra. Azok a patkányok, amelyeknél kevesebb mint 25 CFU/vaginális tampon volt az eredmény, gyógyultnak minősültek. 2% miconazol-nitrátot tartalmazó krém alkalmazásával 25 patkány gyógyult meg. 12% miconazol-nitrátot tartalmazó krém alkalmazásával 5 patkány gyógyult meg. Miconazol-CHS-trisz-t (összes miconazol 10 mg és a CHS 40 mg) tartalmazó krém alkalmazásával 3 patkány gyógyult meg. Ugyanezen krém (de a miconazol 20 mg volt) alkalmazásával 7 patkány gyógyult meg. Miconazol-CHS-trisz-t (összes miconazol 3,4 mg, a CHS 13,6 mg és Wecobee 20,5 mg) tartalmazó kúp alkalmazásával 3 patkány gyógyult meg. Miconazol-CHS-trisz-t (összes miconazol 10,5 mg, CHS 20,6 mg és Wecobee 80,3 mg) tartalmazó kúp alkalmazásával 5 patkány gyógyult meg. 1.2. Inulin beépítése koleszterin-hemiszukcinát multilamelláris liposzómákba Koleszterin hemiszukcinát-multflamelláris liposzómákat, amelyek 3H-inulint tartalmaunak, mint beépített szert, a következőképpen állítunk elő: 3H-inulint (1,0 mCl/ml, New England, Nuclear, Boston, MA) felddunk2ml0,01 M triszHa (pH=7,3),0,014MNaClpufferban. Ezután az oldathoz 40 mg CHS-trisz sót adunk és az így kapott keveréket mechanikusan, rázással diszpergáljuk. Tejszerű szuszpenzió képződik, jelezve a multilamelláris liposzómák képződését. A szuszpenziót állni hagyjuk 2 órán át, ekkor a szuszpenziót 10ml végső térfogatra hígítjuk, 0,01 M trisz-HQ (pH-7,3), 0,14 M NaCl puffert használva. Egy 10 pJ-es aliquot rész radiaktivitását meghatározzuk, ez 24625 beütés/perc/10 pl, az aliquot részt 10 szcintillációs folyadékhoz (40 mg omnifluor [New England Nuclear, Boston MA], 6 liter toluol, 4 liter etüéngükol-mono-etüéter) adva és aradioaktivitást Beckhmann L6800 folyadék-szcintülációs számlálóval (windows set at 0,400) meghatározva. A beütés/perc (cpm) radioaktivitást átalakítjuk bomlás/perc (dpm) értékké, a „quench correction” H módszert használva [Horrock, D. L. The Number Concept, Beckmann Instruments, 1977]. A CHS-multüamelláris liposzómákat 15 percig centrifugálva (10 000 x g) gömböcskékké alakítjuk. Az így kapott gömböket háromszor mossuk, úgy, hogy a gömböcskéket 10 ml, 0,01 M trisz-HQ (p=7,3) 0,14 M NaQ pufferban újra szuszpendáljuk és 15 percig újra centrifugálva (10 000 x g) ismét gömböcskékké alakítjuk. A mosott liposzóma-gömböket 0,01 M trisz-HCl (pH=7,3), 0,14 M NaCl, 10 ml végső térfogatú pufferban újra szuszpendáljuk, egy 10 pl-es aliquot rész radioaktivitását meghatározzuk, ez 3442 beütés/perc/10 pl.így a kiindulási 3H-inulinnak összesen körülbelül 14%-a épült be a CHS-multüamelláris liposzómákba. 1.2.1. Inulin beépülési hatásfoka koleszterin-hemiszukcinát-multilamelláris liposzómákba és tojás foszfatidil-kolin-mulnlamelláris liposzómákba A koleszterin-hemiszukcinát különböző koncentrációit tartalmazó multüameUáris liposzómákba beépített inulin beépülési hatásfokait összehasonlítjuk a tojás foszfatidü-kolin különböző koncentrációit tartalmazó multüameUáris liposzómákba beépített inulin beépülési hatásfokaival. Meg keU jegyeznünk, hogy a beépülés hatásfoka bármely liposzómára a kettős rétegek által bezárt és kint maradt vizes fázis hányada, és ezt százalékban fejezzük ki. MultüameUáris Uposzómákat készítünk, amelyek tojás foszfatidü-kolinból (EPQ vagy CHS-trisz sóból áU- nak, azonos előírások szerint, hogy a beépülés hatásfokát összehasonlítsuk. így CHS-trisz sót 40,80,160,320, vagy 400 mg koncentrációban 2 ml, 0,01 M trisz-HQ (pH=7,3), 0,14 M NaQ pufferban 5 pl 3H-inulinnal (217,0 mCi/mg) alaposan összekeverünk, és 2 órán át áU- ni hagyunk, CHS-multüamelláris Uposzómákat képezve, 3H-inulinnal mint beépített vegyületteL Még 3 ml, 0,01 M trisz-HCl (pH=7,3), 0,14 MNaQ puffert adunka 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 11
