203205. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szterin liposzómák előállítására
1 HU 203 205 B 2 lasztani, s ezáltal mesterségesen növelnénk a látszólagos bezárási vagy beépülési hatásfokot, ennek a lehetőségnek a kiküszöbölésére ki kell mutatni, hogy az előzetesen elkészített liposzómák szuszpenziójához adott vízoldható vegyület nem eluálható együtt az elkészített liposzómákkal; c) a gélszűréssel kezelt liposzómák szétzúzása detergensekkel vagy más, membránt megbontó szerekkel a bezárt molekula gélszűrési sémájában eltolódást kell előidézzen a liposzóma csúccsal azonos helyzetből abba az irányba, ahová a szabad molekula elmozdul. A koleszterin savszármazékká alakításához használható szerves savak például - de nem korlátozó jelleggel - a karbonsavak, dikarbonsavak, polikarbonsavak, hidroxisavak, aminosavak és poliaminosavak. Mivel a sóformák növelik a szerv es savak vízoldhatóságát, bármely szerves sav használható ugyan a szterin savszármazékká alakításához, de előnyös, ha a szerves sav maga is vízoldható. Byen vízoldható szerves savak például - de nem korlátozó jelleggel - a vízoldható alifás karbonsavak, így az ecetsav, propionsav, vajsav, valériánsav és hasonlók (megjegyezzük, hogy az 1-4 szénatomot tartalmazó savak keverednek vízzel; az 5 szénatomot tartalmazó részben oldható és a hosszabb láncú szabad savak gyakorlatilag oldhatatlanok); a vízoldható alifás dikarbonsav ak, így a malonsav, borostyánkősav, glutársav, adipinsav, pimelinsav, maleinsav és hasonlók (megjegyezzük, hogy a rövidebb láncúak észrevehetően jobban oldódnak vízben, a vízben oldhatóság határvonala a C6-C7 szénatomnál van); a vízben oldhatatlan aromás dikarbonsavak, így a hemimellitsav, trimezinsav, szukcinimid és hasonlók; a polikarbonsavak; vízoldható hidroxisavak, így a glikolsav, tejsav, mandulasav, glicerinsav, almasav, borkősav, citromsav és hasonlók (megjegyezzük, hogy a karbonilcsoporthoz a-helyzetű szénatomhoz kapcsolódó elágazó láncot tartalmazó a-hidroxilsavak kevésbé érzékenyek hidrolízisre és ezért a találmány szerinti eljárás gyakorlásában előnyösek); és bármely aminosav vagy poliaminosav. A szerves sav észter- vagy éterkötéssel kapcsolható a szterin egy hidroxilcsoportjához, a hagyományos eljárásokkal [például a 3 859 047,4 040 784,4 042 330, 4 183 847 és 4 189 400 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírások], A savszármazékká alakított szterinek sóformáit előállíthatjuk úgy, hogy mind a szterin szerves savszármazékát, mind a só ellenionját (például a só szabad bázisát) feloldjuk egy megfelelő illékony oldószerben és az oldószert lepárlással vagy hasonló technikával eltávolítjuk, a maradék a szterin szerves savszármazékának sóformájából áll. A megfelelő só képzéséhez alkalmazható ellenionok, például - de nem korlátozó jelleggel - a trisz, a 2-amino-2-metil-l ,3-propándiol, 2-amino-etanol, bisz-trisz-propán, trietanol-amin és hasonlók. Ellenionként használható egy ionizálható bioaktív szer szabad bázisa, így a miconazole szabad bázis és hasonlók, így tehát a bioaktív szer használható mint ellenion. A találmány szerinti szterin-liposzómákat úgy állítjuk elő, hogy egy vizes fázishoz hozzáadjuk a koleszterin szerves savszármazékának sóformáját, amely kettős réteget tud képezni, úgy, hogy a származékká alakított szterin olyan mennyiségben van jelen, amely elegendő a liposzómák (vagyis beépített vizes rekeszt tartalmazó tökéletesen zárt kettős rétegek) képzéséhez. A készítményt ezután rázzuk, amíg a multüamelláris szterin-liposzómák tejszerű szuszpenziója képződik. Az előnyös kiviteli mód szerint a vizes fázis oldatban tartalmazza a sót, ez megkönnyíti a liposzómák képzését. Továbbá, ha a szterin szerves savszármazékának disszociált sóformája semleges pH-értéken negatív töltésű, akkor a vizes puffemak lényegileg mentesnek kell lennie többvegyértékű kationoktól. Hasonlóképpen, ha a szerves savszármazék disszociált sóformája semleges pH-értéken pozitív töltésű, akkor a vizes puffemak lényegileg mentesnek kell lennie többvegyértékű anionoktól. A multilamelláris liposzómák [például foszfolipid vesiculák vagy koleszterin liposzómák Brockerhoff és Ramsammy szerint, Biochim. Biophys. Acta. 691, 227-232 (1982) előállítására szolgáló ismertetett eljárásokkal teljes ellentétben, az eljárás a találmány szerinti szterin multüamelláris liposzómák előállítására nem igényli szerves oldószerek alkalmazását. Továbbá Brockerhoff és Ramsammy fent említett eljárásától eltérően, nem szükséges ultrahang-kezelés a - szterin-multilamelláris liposzómák képzéséhez. A találmány szerinti szterin-multilamelláris liposzómák tejszerű szuszpenziójához használt ultrahang-kezelés vagy French press (SLM-Aminco, Urbana, ILL) alkal- .. mazása, s az ezt követő ultrahang-kezelés valójában . arra szolgál, hogy a multüamelláris szterin-liposzómák tejszerű szuszpenzióját unüamelláris szterin-liposzómák tiszta szuszpenziójává alakítsuk át. A multüamelláris szterin-liposzómák többszöri átsajtolása mérsékelt nyomáson egy olyan szűrőn, amelynek pórusai 100 nm, vagy ennél kisebb átmérőjűek, ugyancsak használható unüamelláris szterin-liposzómák előáüítására. Ezt az átsajtolási technikát részletesen ismerteti az ezzel a bejelentésünkkel összefüggésben lévő 622 690 sorozatszámú bejelentésünk, Cullis és munkatársai: „Extrusion Technique for Producing Unüamellar Vesicles” című munkája, amelyet ebbe a bejelentésünkbe referenciaként beépítünk. Amint azt már említettük, a szterin szerves savszármazékának trisz-sóformája előnyösen használható a találmány szerint eljárás gyakorlatában. így például egy koleszterin-hemidikarbonsavnak, így egy hemiszukcinátnak vagy hemiszukcinátok keverékének a trisz-sóformája kiváltképpen alkalmas az in vivo beadandó szteroidos liposzómák vesicula kettős rétegeinek képzéséhez. így például, ha koleszterin-hemiszukcinátot használunk, akkor 2,5-700 pmól trisz-sóformát adunk 2,0 ml, trisz(hidroxi-metü)-amino-metánhidrokloridot tartalmazó vizes pufferhoz a vesiculák képzése céljából. Ebben az esetben a vizes puffemak lényegüeg mentesnek kell lennie kétvegyértékű vagy többvegyértékű kationoktól. A vízoldható vegyületek, vízben oldhatatlan vegyületek vagy vízben alig oldódó vegyületek beépítését szterinek szerves savszármazé5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
