203205. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szterin liposzómák előállítására
1 HU 203 205 B 2 tét és a szterin szerves savszármazékának sóformáját adhatjuk egy szerves oldószerhez, úgy, hogy mindkettőt szolubilizáljuk (együtt szolubüizáljuk). A szerves oldószert ezután lepárolva, film marad vissza, amely homogén eloszlásban tartalmazza a vízben oldhatatlan vegyületet és a szterin-származékot. Vízben oldhatatlan vegyületeket bezáró szterin liposzómák képződnek, ha a filmhez rázás közben vizes puffert adunk. A találmány szerinti szterin liposzómák kiváltképpen előnyösek, ha a beépítéshez vízben oldhatatlan vagy vízben alig oldódó bioaktív szereket alkalmazunk. Ez lehetővé teszi vízben oldhatatlan gyógyszerek in vivo beadását, továbbá lehetővé teszi az in vivo beadáshoz a vízben oldhatatlan vegyülctek nagy koncentrációit, mivel a dózis: térfogat arány változtatható. A találmány szerinti szterin liposzómák előnyösek akkor is, ha ezeket vízben oldható bioaktív szerek beépítésére használjuk. A találmány szerinti szterin liposzómák használhatók továbbá in vitro diagnosztikai vizsgálatokhoz. A találmány szerinti szterin liposzómák számos előnyös tulajdonsággal rendelkeznek: 1. könnyen és gyorsan előállíthatok; 2. beépítési hatásfokuk nagy, összehasonlítva a foszfolipid multüamellárisliposzómákéval; 3. elkészítésükhöz nincs szükség szerves oldószerek használatára (bár a találmány szerinti szterin liposzómák elkészíthetők szerves oldószerek alkalmazásával is); és 4. magukba zárhatnak egy bioaktív vagy gyógyhatású szert, így például baktérium - vagy gombaellenes vegyületeket, peptideket, hormonokat, vitaminokat stb„ amelyek - in vivo beadás esetében - felszabadulnak és anyagcserével átalakulnak. A beépített szer in vivo sorsa függ a beadás módjától. Előnyösen alkalmazható találmány szerinti készítmények a koleszterin-hemiszukcinát trisz(hidroximetü)-amino-metán-só mellett tartalmaznak egy gombaellenes szert, ami célszerűen Miconazole, Terconazole vagy Econazole, Isoconazole, Tioconazole, Bifonazole, Clotrimazole, Ketoconazole, Butaconazole, Itraconazole, Oxiconazole, Fenticonazole, Nystain, Naftifine, Amphotericin B, Zinoconazole vagy Ciclopiroxolamine. A készítmény használható gombás fertőzések kezelésére, és beadható helyüeg, beleértve az orális és intravaginális alkalmazást. Előnyösen alkalmazhatók még azok a készítmények, amelyek tartalmazzák a koleszterin-hemiszukcinát trisz(hidroxi-metü)-amino-metán-sót és egy peptidet, elsősorban hidrofób pepiidet, így humán növekedési hormont, marha növekedési hormont, sertés növekedési hormont vagy inzulint. A készítmény beadható a tejhozam növelésére vagy egy emlősnél a kezdeti növekedés fokozására. Az ábrák rövid ismertetése Az 1. ábra grafikusan mutatja be a beépült oldott anyag (króm) és a multilamelláris liposzómák előállításához használt koleszterin-hemiszukcinát (CHS) koncentrációjának fordított összefüggését. A 2. ábra négy különböző koleszterin-hemiszukcinát multüamelláris liposzóma (CHS-MLV) készítmény röntgendiffúziós vizsgálatának eredményeit szemlélteti. A 3. ábra a koleszterin-hemiszukcinát multüamelláris liposzómák (CHS) és a tojás foszfatidü-kolin multilamelláris liposzómák (EPC) elektron spin rezonancia adatait ábrázolja. A. 4. ábra grafikusan szemlélteti a koleszterin-hemiszukcinát liposzómák és a tojás foszfatidü-kolin liposzómák duzzadási pontjait különböző tónusú vizes pufferokban. Az 5. ábra grafikusan szemlélteti a koleszterin-hemiszukcinát liposzómákba beépített indometacin hatását ízületi duzzanat csökkentésére, intramuszkulárisan alkalmazva. A 6. ábra egérnek intravénásán beadott 14C-diazepam eloszlását szemlélteti a szervezetben, nem beépítve (szabadon) vagy koleszterin-hemiszukcinát kis unilameüáris liposzómákba (CHS-SUVs) beépítve. A 7A, 7B és 7C ábra egérnek intravénásán beadott 51króm eloszlását szemlélteti a szervekben, koleszterin-hemiszukcinát-multüamelláris liposzómákba (CHS-MLVs) vagy tojás foszfatidü-kolin stabü plurilameüáris liposzómákba (EPC-SPLVs) beépítve vagy beépítés nélkül, szabadon. Az ábrák részletes ismertetésére a példákkal kapcsolatban kerül sor. A találmány tárgya tehát eljárás vízoldható, részben vízoldható, vagy vízben oldhatatlan vegyületek beépítésére alkalmas liposzómák előáüítására, mely liposzómák kettős rétegei koleszterin szerves savszármazékainak sóformaiból állnak és ezek zárt kettős rétegeket tudnak képezni. A találmány szerinti unüamelláris és multüameüáris liposzómákat úgy állítjuk elő, hogy a liposzómaképző anyagot, a koleszterin valamely szerves savszármazékának egy sóformáját hidratáljuk, majd kívánt esetben ismert módon egy vízoldható vagy vízoldhatatlan anyagot építünk be a liposzómába, és/vagy kívánt esetben a kapott multilameüáris liposzómát ismert módon unüameüáris liposzómává alakítjuk. A szterin egy szerves savszármazékának bármely sóformája használható a találmány szerinti eljárásban, amely vizes oldatokban teljesen zárt kettős rétegeket vagyis liposzómákat tud képezni. Az, hogy egy szterin szerves savszármazékának speciális savformája megfelel-e, attól függ, hogy képes-e úgy bezárni egy vízoldható vegyületet, hogy a vegyület ne legyen érintkezésben a külső környezettel. Annak a határozott eldöntésére, hogy valamely liposzóma vizes rekeszébe a beépülés megtörtént, a következő kritériumok lettek megáüapítva [Sessa and Weissmann: J. Bioi. Chem., 245,3295 (1970)]: a) vüágosan el keü válnia a szabad vegyületnek a bezárt vegyülettől, amit gélszűréssel vizsgálunk; b) nem szabad hidrofób vagy töltés-töltés kölcsönhatásnak lenni a legkülső kettős réteg és a beépült vegyület között, mivel ez azt eredményezhetné, hogy molekulaszitával nem lehetne a szabad vegyületet a liposzómáktól elvá5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
