203198. lajstromszámú szabadalom • Eljárás immungátló, monokin-, különösen interleukin-1-gátló hatású gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 198 B 2 A találmány szerinti eljárás egyik előnyös megvalósítási módjának révén a fenti 4. és 4.1.-4.3. pontokban említett módszerrel kezelhető: a szöveti kalcium-kiürülés mint a csontban vagy porcban végbemenő degenerate folyamat, így például a fogínymegbetegedések, csontízületi gyulladás, csigolyamerevség egyik komponense; a különböző eredetű csontritkulások, például a klimax során, illetve a menstruáció megszűnése után jelentkező csontritkulás, valamint az aggkori csontritkulás, mozgáshiány vagy baleset következtében bekövetkező csontritkulás; egyéb csőn tbán talmak, például a csontok ásványi anyagveszteségével kapcsolatos heveny és krónikus állapotok; lehetővé válik a csontlágyulás során a specifikus terápiás kezeléshez járuló adjuváns kezelés; csontok gyógyítása és regenerálása, valamint a lappangó tetánia és tetánia kezelése. Tekintettel a kalcium-felszívódást és a csont kalciumtartalmának kiürülését módosító sajátságaikra, a találmány szerinti eljárásban alkalmazható vegyületek különösen alkalmasak olyan ízületi gyulladásos állapotok kezelésére, ahol ezek a folyamatok játsszák a főszerepet, különösen a csontízületi gyulladás és a csigolyamerevség kezelésére. 5. Módszer fibrózis vagy fibrotikus állapotok kezelésére, például veleszületett májfibrózis, szívbelhártya-fibrózis, cisztás fibrózis, tüdőfibrózis, retroperitoneális fibrózis, rákos eredetű fibrózis, húgyhólyag körüli fibrózis, burjánzó fibrózis, szövethelyettesítő fibrózis, méhfibrózis, műtét utáni tapadásos elváltozások és hegek kezelésére egy arra rászoruló egyénen; e módszer abban áll, hogy ennek az egyénnek a számára a találmány szerinti eljárásban alkalmazható valamely vegyület hatásos mennyiségét adagoljuk. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott vegyületek különösen alkalmasak a tüdőfibrózis kezelésére. 6. Módszer daganatok támadásának vagy daganatok növekvésével kapcsolatos tüneteknek a kezelésére - vagy támogató vagy kombinációs kezelésére - (például izomfehérje bomlásának kezelésére, Kreutzfeld-Jacob-féle betegség, Alzheimer-betegség, kóros aluszékonyság, köszvény, endotoxin-előidézte sokk és felhám-hólyagkiütés (epidermolysis bullosa) kezelésére egy arra rászoruló egyénen; e módszer abban áll, hogy ennek az egyénnek a számára a találmány szerinti eljárásban alkalmazható valamely vegyület hatásos mennyiségét adagoljuk. A 6. pontban említett kóros állapotok közül a találmány szerinti eljárásban alkalmazható vegyületek különösen a daganatok növekvésével járó tünetek (például az izomfehérje bomlása), köszvény és endotoxinsokk kezelésére alkalmazhatók. A találmány szerinti eljárás révén lehetővé válik: A) a találmány szerinti készítmények alkalmazása a fenti 1 -6. pontokban felsorolt kóros állapotok kezelésére; B) a találmány szerinti eljárásban alkalmazható vegyületek gyógyászati készítményekké alakítása a fenti 1-6. pontokban felsorolt kóros állapotok kezelésében történő alkalmazásra; C) a találmány szerinti olyan készítmények alkalmazása az 1.-6. pontokban felsorolt kezelési módszerekben, amelyek a találmány szerinti eljárásban alkalmazható vegyületeken kívül egy vagy több, gyógyászati szempontból elfogadható hígító- vagy vivőanyagot tartalmaznak. A találmány szerinti eljárásban alkalmazható vegyületek monokin-gátló, különösen az IL-1 felszabadulását és elválasztását gátló hatása, másrészt a találmány szerinti eljárásban alkalmazható vegyületek alkalmazási lehetősége a fentiekben meghatározott betegségek és kóros állapotok kezelésére standard farmakológiái módszerekkel, illetve klinikai vizsgálatokkal igazolható; az alábbiakban mindezt részletesen leírjuk. l.Az IL-1 elválasztására kifejtett gátló hatás 1.1 .Biológiai vizsgálat (biológiai meghatározás) porcsejteken Bevezetés Igazolták, hogy az IL-1 viszonylag specifikus célsejtjei a nyúlból származó, összeolvadó porcsejt-tenyészetek. A tisztított IL-1 [J. Immunoi. 138, 496 (1987)], a rekombináns emberi IL-1-ß (a következőkben: rhIL-1), valamint a stimulált emberi monocitákról, egér- és nyúl-hashártya makrofágokról vagy a P388D, egér-sejttörzsről gyűjtött, kondicionált közegek [J. Immunoi. 114, 894 (1975)] a porcsejtek elválasztásának lefolyásában jellegzetes elváltozásokat idéznek elő. Közelebbről, egy lappangó állapotban lévő fém-proteináz (a következőkben: MP) aktiválódik, míg a plazminogén-aktivátor (a következőkben: PA) elválasztása csökken. Az MP-válasz viszonylag specifikus az IL-1 -re vonatkozóan, mivel az IL-2, TNF-a, a rekombináns emberi interferon (a következőkben: rh IFN-a), rh IFN^y, a forbol-mirisztát-acetát, konkanavalin A, prosztaglandin-E és az indometacin ezt nem befolyásolja. A monokinnal indukált PA-elválasztás csökkenése nagyon érzékeny paraméter (a LAF-teszthez hasonlóan, lásd alább), ámbár nem annyira specifikus, mint az MP indukciója [Biochem. J. 219, 667 (1984); Brit. J. Rheumatol. 24 (Supp. 1), 128 (1985); valamint J. Immunol. 138,496(1987)]. 1.1 .a Az egérből származó makrofág-monokin gátlása Egér hashártyájából elkülönített, nem-stimulált [J. Exp. Med. 148, 435 (1987)] in vitro egy napon át tenyésztettünk a vizsgálandó vegyület különböző koncén trációinak jelenlétében. A tenyészközegeket 1:1 térfogatarányban friss közeggel hígítottuk, és összeolvadó nyúl-porcsejtekhez adtuk. További 2 napelteltével meghatároztuk a porcsejttenyészet közegében az MP-aktivitást. E vizsgálat során a találmány szerinti eljárásban alkalmazható vegyületek, különösen a D2 jelű vegyület a monokin felszabadulását körülbelül 3,0-100 pM koncentráció-tartományban gátolták. Meghatároztuk a D2 jelű vegyület lényegében tiszta Z-izomer alakjának ED50 értékét 3-5 külön kísérletben (minden egyes kísérletet összesen három ismétlésben végeztünk), és azt 100 pM nagyságrendűnek találtuk. 5 10 16 20 25 30 36 40 45 50 55 60 4
