203102. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kondenzált pirimidinszármazékok és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
11 HU 203 102 B 12 16. eljárás A (XXI) általános képletű vegyületet guanidinnel kezeljük és ekkor a vegyület az oxocsoporton és az észtercsoporton reagál, majd ezt követően gyűrűzárási reakció (azaz ciklizálás) megy végbe és így új kondenzált pirimidingyűrűt kapunk, ©reakciókörülmények azonosak a 6. eljárásnál megadott körülményekkel. Kívánt esetben az A gyűrűt a megfelelő aromás gyűrűvé alakíthatjuk ismert reagensekkel ismert módon végzett dehidrogénezéssel. 17. eljárás A16. eljárásban kapott (XXII) általános képletű észtert dezészterezési reakciónak vethetjük alá és így a (B-4) általános képletű karbonsavat kapjuk. Az észterezési reakciót lefolytathatjuk a 7. eljárásnál leírtak szerint Az 1-17. eljárásokban alkalmazott reakciók, reagensek és reakciókörülmények és a (II) általános képletű vegyületek előállítása ismert és a következő irodalmi helyeken ismertetett: J. F. W. Mcomine, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, London és New York (1982) és M. Fieser és L. Fieser, Reagents for Organic Synthesis 1-10. kötet, Wiley-Interscience, New York, London, Sydney és Toronto (1969-1982). Az előző eljárásokkal előállított találmány szerinti vegyületek és intermedierek ismert módon izolálhatók és tisztíthatók, így például bepárlással, oldószeres extrakcióval, kromatográfiásan, azeotropiásan vagy átkristályosítással. Az (I), (II) és (III) általános képletű vegyületek sókat alkothatnak. Az ilyen sókat ismert módon állítjuk elő, és ezek a sät gyógyászatilag elfogadható bázisokkal vagy savakkal képzett sók vagy kvatemer sók. A bázisokkal képzett sók magukban foglalják az alkálifémsókat, az alkáliföldfémsókat, az ammóniumsókat és a helyettesített ammóniumsókat, így a kálium-, nátrium-, lítium-, kalcium-, magnézium-, alumínium-, cink-, ammónium-, trimetil-ammónium-, trietil-ammónium- trietanol-ammónium-, piridinium- vagy helyettesített piridinium-sókat. A savakkal képzett sók magukban foglalják az ásványi savakkal, így hidrogén-kloriddal, kénsavval, salétromsavval, foszforsavval vagy bórsavval képzett sókat, vagy a szerves savakkal, így oxálsavval, borkősavval, ecetsavval, trifluor-ecetsavval, metán szulfon-savval vagy kámforsavval képzett sókat. A kvatemer sók magukban foglalják a metil-bromiddal, metil-jodiddal, metil-metánszulfonáttal, metil-benzolszulfonáual és metil-p-toluolszulfonáttal képzett sókat. Az (I), (II) és (IV) általános képletű vegyületek ikerionokat is képezhetnek. Az (I) általános képletű vegyületek és sóik kiváló antitumor hatásúak, egerek tumorsejttörzsein (P388, L1210, L5178Y, B16 melanoma, MethA, Lewis Lung Carcinoma, SI 80 szarkóma, Ehrlich karcinoma, Colon 38) és humán sejttörzseken (HL60, Lu65) vizsgálva, csökkentik a melegvérű állatok tumorjait (például melanoma, szarkóma, masztocitoma, karcinoma, ncoplazia) és megnövelik a tumorral rendelkező melegvérű állatok élettartamát. A következőkben az (I) általános képletű vegyületeknek és sóiknak a farmakológiai hatását mutatjuk be. A11. és 12. előállítási példa szerint kapott vegyületek sejtnövekedést gátló hatását (IC») HL-60-ban és HEL- ben a következő módszerekkel határoztuk meg: 1. Humán leukémia HL-60 sejteknek (2 x 1(? sejt/ml) GTT tenyésztési közegből (Wako Pure Chemicals) készített szuszpenzióját, amely a találmány szerinti vegyületeket is tartalmazta, 96 mikromélyedést tartalmazó lemez mélyedéseiben (0,2 ml egy mélyedésben) helyeztük be és 37 'C hőmérsékleten 5% C02-t és 95% Oj-t tartalmazó atmoszférában 68 órán át tartó tenyésztésnek vetettük alá. A kapott tenyészethez 1 mikro Ci-pH] timidint (5Ci/mmól) adtuk és a tenyésztést 4 órán át folytattuk. A sejtek által felvett timidin mérésének céljából a savban oldhatatlan frakciókat összegyűjtöttük és meghatároztuk a radioaktivitásukat folyékony szcindllációs számlálóval. A vegyületek IC*, értéke a vegyületeknek az a koncentrációja, amely ahhoz szükséges, hogy a kezeletlen kontroll által felvett radioaktivitást 50%-kal csökkentse. 2. Humán embrió tüdő fibroblaszt HEL-nek (1 x 10* sejt/ml) MÉM tenyésztési közegben (Japan Flow Laboratories) készített szuszpenzióját 96 mikromélyedést tartalmazó lemez mélyedéseibe (0,1 ml egy mélyedésben) helyeztük be és 37 *C hőmérsékleten 5% CO2 és 93% 02-t tartalmazó atmoszférában 24 órán át tartó tenyésztést folytattunk le. A kapott tenyészethez MÉM tenyésztési közeget adtunk, amely a találmány szerinti vegyületeket tartalmazta, és a tenyésztést 72 órán át folytattuk. A tenyésztési közeget MTT-t tartalmazó tenyésztési közeggel (Dojindo Laboratories) helyettesítettük 1 (ig mennyiségben, majd hozzáadtunk 10%-os SDS-t (Wako Pure Chemicals), majd egy éjszakán át inkubáltunk. Multiszken (Titertek) berendezéssel 590 nm-nél mértük az abszorbanciát és meghatároztuk a kezeletlen kontrolihoz viszonyítva az IC« értékeket. Az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza. 1. táblázat A vizsgált vegyület HL-60 (pg/ml) ICjoHEL (flg/ml) 11. előállítási példa szerinti vegyület <0,0025 10,0 12. előállítási példa szerinti vegyület < 0,0025 5,0 Mint az előző eredmények mutatják, az (I) általános képletű vegyületek és sóik kiválóan gátolják a HL-60 sejtnövekedést, ugyanakkor nem fejtenek ki jelentős toxicitást a HEL-lel szemben. A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek és sóik alacsony toxicitásúak, számottevő antitumor hatásúak. így az (I) általános képletű vegyületeket és sóikat tartalmazó készítményeik alkalmazhatók melegvérű állatok, különösen emlősök, (például emberek, egerek, patkányok, macskák, nyulak) tumorjainak a kezelésében antitumor szerként Az (I) általános képletű vegyületeket és sóikat antitumor szerekként alkalmazva adagolhatjuk orálisan vagy parenterálisan önmagukban vagy porok, granulátumok, kapszulák, kúpok és injekciók formájában, amelyeket ismert módon gyógyászatiig elfogadható hígítóanyagokkal, hordozóanyagokkal és segédanyagokkal állítunk elő. Az adagolási mennyiség függ az állattól, a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
