202883. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-interferon előállítására és tisztítására

1

HU 202 883 B

2

3. ábra: A 4,5 pH-n végzett kicsapás utáni fordított

fázisú HPLC- kromatogramja; KI, K2, K3 és K6 komponensek ábrázolása.

4. ábra: A 4,5 pH-n végzett kicsapás utáni gélpermeációs HPLC- kromatogramja.

5. ábra: A 4,5 pH-n 0,1-0,5 mólos ammónium-acetát-gradienssel MONO-S oszlopon végzett FPLC-kromatogramja.

6. ábra: A MONO-S csúcs „váll-ffakció”-jának fordított fázisú HPLC-kromatogramja.

7. ábra: A MOMO-S csúcs „váll-frakció”-jának gélpermeációs HPLC-kromatogramja.

8. ábra: A MONO-S csúcs „fő £rakció”-jának fordított fázisú HPLC-kromatogramja.

9. ábra: A MONO-S csúcs „fő firakció”-jának gélper- 15

meációs HPLC-kromatogramja.

10. ábra: A MONO-S csúcs „fő frakció”-ja kromatofókuszálásának kromatogramja.

11. ábra: A tandem-kromatográfia utáni savas eluátum

valamint a fordított fázisú HPLC-vel elvá- 20

lasztott K1-K7 komponensek gélelektroforézisének fényképe.

Í2.a)-12.f) ábrák:

Különböző indikációknál végzett anti-a-in- 5 terferon-antitest vizsgálatok eredményei.

Teszt-típus: Neutralázációs meghatározás (10 iU/ml IFN-a/A - 599/EMC)

Összes paciens száma:

75

Tumor indikált paciensek száma:

58

Stimulált antitest nélküli paciensek

száma:

58

Vírus indikációs paciensek száma

17

Stimulált antitest nélküli paciensek

száma

17

13. ábra: Vázlat az anti-a-inteferon-antitest meghatározáshoz.

1. táblázatösszesített táblázat a tisztításról.

2. táblázatA tisztaság értékelése HPLC-val.

1. táblázat

Tisztítási fokozat

Térfogat

Protein

IFN

I.E. IFN

Kitermelés

(ml)

(mg)

(LE.*)

mg protein

(%)

Nyers extraktum Ammónium-szulfátos

2540

5330

17,lxl09

3,21xl06

100

felülúszó

3120

nmi.*

0,12xl09

0,7

Oldás és dialízis utáni csapadék

282

n.m.*

13,3xl09

77,6

A tandem-kromatográfia

eluátuma

16,8

54,4

12,3xl09

226xl06

71,9

A 4,5 pH-s kicsapás

csapadéka

18,3

46,3

11,8x109

255x106

69,0

FPLC MONO-S-en

a) „váH”-frakció

9,1

4,1

l,33xl09

324x106

7,7

b) főfrakció

9,8

16,1

5,18xl09

322xl06

30,3

* n.m. - nem mértük

I.E. - Nemzetközi Egység

2. táblázat

Gélpermeációs HPLC

Fordított fázisú HPLC*

*

IFN

A monomer Ms.>70.000 K2+1

K3 K4

K5

K6

K7

tisztasága

(mg/ml)

(Ms. 19.000)

Tandem-kromatográfia utáni savas eluátum

2,14

74%

100

7,0 n.k.*

1,6

22,8

~7

Felülúszó a 4,5 pH-s kicsapás után

2,0

79%

100

4,0 n.k.

<1

5,4

n.k.

MONO-S FPLC után a) „váir-frakció

0,45

>99% <0,2%

100

16,0 n.k.

n.k.

n.k.

n.k.

b) főfrakció

1,64

>99% <0,2%

100

1,2 n.k.

nk.

nk.

nk.

* - nem kimutatható

** - relatív csúcsmagasságok (214 nm), K2 + 1 - 100%

13