202883. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-interferon előállítására és tisztítására
1 HU 202 883 B 2 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás rekombináns a-interferon előállítására és tisztítására, azzal jellemezve, hogy az a-interferont kódoló gént tartalmazó gazdaszervezet tenyésztésével kapott sejttömeg savas, előnyösen 2,0 pH-n való jelölésével nyert biomasszát savas közegben feltárjuk, a kifejezett interferontól a sejttörmelékeket enyhén lúgos közegben leválasztva elkülönítjük, az interferont töményítjük, majd egy cellulóz-előoszlopból és egy hordozóhoz kötött monoklonális anti-interferon antitesttel töltött affinitáskromatográfiás oszlopból álló rendszeren tandem-kromatográfiával előtisztítjuk, az Cys Asp Leu Pro Gin Thr His Ser Met Leu Leu Ala Gin Met Arg Arg Lys Asp Arg Arg Asp Phe Gly Phe Gin Phe Gin Lys Ala Glu Thr Ile Gin Gin Ile Phe Asn Leu Phe Ser Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Gin Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Lys Tyr Phe Gin Arg Ile Thr Leu Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val Phe Ser Leu Ser Thr Asn Leu Gin eluátum pH-ját 4,0-4,8-ra állítva szennyezéseket választunk le, majd az interferont egy kationcserélővei töltött oszlopon eluálószeiként egy illékony - a liofilizálás során eltávozó anyagokat tartalmazó - puffert 5 használva pH- vagy koncentráció-gradienssel, előnyösen lineáris koncentrációgradienssel, amelyet 4,0-5,0, előnyösen 4,5 pH-jú, előnyösebben 0,1-től 1,0 mólosig, legelőnyösebben 0,1-től 0,5 mólosig terjedő koncentrációjú ammónium-acetát pufferral hozunk létre, 10 utótisztítjuk, és végül liofilizáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás rekombináns humán-a-interferon előállítására és tisztítására, azzal jellemezve, hogy a Leu Gly Ser Arg Arg Thr Leu Ile Ser Leu Phe Ser Cys Leu Pro Gin Glu Glu Phe Gly Asn Pro Val Leu His Glu Met Ile Thr Lys Asp Ser Ser Ala Ala Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr Gin Val Ile Gin Gly Val Gly Val Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg TVr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu aminosavszekvenciájú humán-a-interferont kódolő gént tartalmazó gazdaszervezet, előnyösen E. coli tenyésztésével nyert biomasszát dolgozunk fel. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tandem-kromatográfiás rendszerként egy [(dietil-amino)-etil]-cellulózzal töltött oszlopot alakmazunk. 4. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hordozóhoz kötött monoklonális antitestként az EBI1 monoklonális antitestet használjuk. 5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tisztítandó anyagot a cellulóz-előoszlopról 7,5 pH-jú TRISZ/nátrium-klorid pufferral mossuk le, és az a-interferont utána 25 t%-os etilén-glikol-oldattal készített 0,1 mólos citromsav-oldattal eluáljuk az affmitáskromatográfiás oszlopról. 6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tandem-kromatográfiás rendszer eluátumából a pH 4,5-re állításával választjuk le szennyezéseket. 30 35 14
