202872. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dimer indol-alkaloid-keverék, katarantin és vindolin szétválasztására és kinyerésére alkaloid-keverékből
1 HU 202 872 A 2 nol:cc.NH4OH:viz-100:5:5:2,5:2,5 arányú elegye. Minden lemezre katarantin- és vindolin-standard oldatot viszünk összehasonlítónak. Értékelés UV (54 mm)fényben. A 250 ml-es katarantin-frakciót (mely általában 5x 50 ml részfrakcióból áll) csökkentett nyomáson 40 *C hőmérsékletű vízfürdőn oldószermentesre sűrítjük, így üstmaradékként 4-5 ml ecetsavas olajat kapunk. A 300 ml vindolin-frakciót (mely 7x50 ml részfrakcióból áll) ugyancsak 4-5 ml-ra való betöményítéssel készítünk elő a további tisztításig, illetve kristályosításig. A katarantinos frakciót 100 ml éterben oldjuk és 20 ml 5%-os borkősavas vizes oldatot adunk hozzá intenzív keverés közben. A heterogén elegyből kiválik a katarantin-tartarát. 4 órai keverés során kristályosítjuk, majd szűrjük, kevés vízzel, éterrel mossuk. Termék; 579 mg (80%) katarantin-tartarát, 95%-os tisztaságban. Olvadáspont: 149-150 *C. A fenti módon kapott 579 mg katarantin-tartarátot 10 ml diklór-metánban szuszpendáljuk, majd 5 ml vizet és 0,3 ml koncentrált ammónium-hidroxidot adunk hozzá (pH-7-8). A fázisokat szétválasztjuk és a vizes fázist még 5 ml diklór-matánnal extraháljuk. Az egyesített szerves fázist szárítjuk, szűrjük, bepároljuk. A szárazmaradékot 4 ml etanolban oldjuk és 6%-os kénsavas etanollal Stuphan indikátor-papír mellett 5,4-re állítjuk a pH-t. A kivált kristályokat másnap szűrjük, etanollal mossuk. Termék: 422 mg (a termelés tartarátra számolva: 90%, kiindulási összkivonatra számolva: 73% katarantin-szulfát). Op.: 158-162 'C (98-99% tisztaság). Az így kapott 422 mg katarantin-szulfátot 10 ml diklór-metán:metanol-l:l arányú elegyben oldjuk. Az oldatot 2 ml-re bepároljuk és 1 napig +5 *C-on kristályosítjuk, szűrjük, metanollal mossuk. Termék: 400 mg (68% kiindulási összkivonatra) katarantin-1/2 HíSO^ot kapunk. Anyalúg-feldolgozás: A szulfát-leválasztás és az átkristályosítás anyaglúgját egyesítjük, majd szárazra párlás után a borkősav-éteres anyalúgban oldjuk és a már ismertetett módon a bázist felszabadítjuk. A kapott 0,59 g száraz-maradékot 3 ml széntetraklorid-diklóretán 2:1 arányú elegyében oldjuk és egy 20 ml-es, alumínium-oxidot tartalmazó oszlopra visszük. Az eluciót az Rf 0,75-nél elhelyezkedő „felső foltok” eltávolításáig (a kromatográfiás rendszer: MERCK 5554/UV254-szilikagél-lemez, eluens: etilacetát-benzol-metanol-cc.NH40H- víz-100:5:5:2,5:2,5) széntetraklorid - diklóretán 2:1 arányú elegyével végezzük, majd a katarantin leszorítását fenti elegy 2% etanolt tartalmazó oldatával végezzük. Akatarantin-frakciókat bepároljuk és a kapott 150 mg száraz-maradékból a már ismertetett módon szulfátot képezünk. A kapott 125 mg katarantin-szulfátot a már szintén ismertetett módon diklór-metán-metanol elegyből átkristályosítjuk. Termék: 100 mg katarantin-szulfát, melynek minősége megegyező a főtermékkel. Összes termék: 500 mg katarantin-szulfát (amely megfelel 450 mg katarantin-bázisnak). Ez az analizált katarantinnak 86%-át jelenti. 5. lépés: Vindolin izolálása A kromatográfiásan dúsított vindolin ecetsavas sűrítményét 20 ml benzolban oldjuk, majd 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal a pH-értékét semlegesre állítjuk. A fázisokat szétválasztjuk és az extrakciót még kétszer 5 ml benzollal megismételjük. A benzolos részt 0,2 g aktívszénnel derítjük, 0,5 g vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, majd csökkentett nyomáson szárazmaradékig bepároljuk. Termék: 2,4 g száraz maradék, melyet - 10 ml dietil-éterben feloldva, az oldatot +5 °C-on 24 órát állni hagyva - átkristályosítunk. A kristályokat kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk és megszárítjuk. 700 mg vindolin bázist kapunk, melynek olvadáspontja: 162-163 'C Az anyalúgot szárazra pároljuk. Az 1,6 g száraz maradékot 10 ml széntetraklorid - diklóretán -2:1 arányú elegyében oldjuk és egy 20 ml-es szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Az anyag felvitele után az oszlopot még 40 ml széntetraklorid- diklóretán eleggyel mossuk, majd az eluciót fenti elegy 2% etanolt tartalmazó oldatával végezzük. A kapott vindolin-frakciót szárazra pároljuk. A 600 mg-nyi száraz maradékot 3 ml etil-acetátból átkristályosítjuk, így 450 mg vindolint kapunk. A kristályokat 10 ml diklór-metánban oldjuk, majd amorf száraz-maradékig pároljuk és 5 ml dietiléterből kristályosítjuk. Szűrjük, éterrel mossuk. 300 mg vindolint kapunk, a főanyaggal azonos minőségben. Az összes vindolin-bázis-termelés tehát: 1,0 g (83%). Az egyesített vindolin-bázis olvadáspontja: 162-163 ‘C forgató képessége: [a]f - 26,5* c—1; kloroform); 0,1 n perklórsavval mért hatóanyag-tartalma: 98,2% 2. példa 1. példa 1. lépése szerint 1 kg drog feldolgozása során nyert 6 liter kloroformos kivonatot, melyet vízmentes nátrium-szulfáton történő kezeléssel vízmentesítettünk, a 2. lépés szerint 50 ml etanollal kezeljük, majd csökkentett nyomáson 40 *C hőmérsékletű vízfürdő alkalmazásával kloroformmentesre sűrítjük. A sűrítményhez, (melynek térfogata 18-20 ml) hozzáadunk annyi etanolt, hogy a térfogata 50 ml legyen (ez kb. 30-32 ml). Ezután az 1. példa 3. lépése szerint a továbbiakban úgy járunk el, hogy 1,5 ml ecetsavat adunk az oldathoz, majd kénsavas etanollal az 1. példában ismertetett módon leválasztjuk a dimer-indolalkaloidok szulfát-sóit és a továbbiakban az 1. példa 4. és 5. lépései szerint járunk el. Az egyes izolált alkaloidok mennyisége és minősége megegyezik az 1. példában ismertetett adatokkal. 3. példa (üzemi léptékű eljárás) Az üzemi gyártásban felhasznált drog átlag-hatóanyag-tartalma: Vinblasztin: 150 mg/kg Katarantin: 200 mg/kg Vindolin: 250 mg/kg 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
