202872. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dimer indol-alkaloid-keverék, katarantin és vindolin szétválasztására és kinyerésére alkaloid-keverékből
1 HU 202 872 A 2 lopkromatográfiás úton is elérhetjük, ha a fentiekben említett sav (pK-3,5-nél gyengébb sav) jelenlétében végezzük az oszlopról az alakloidok elucióját. Ebben az esetben célszerű először az oszlopra felvitt anyagot kloroformmal a tölteten eloszlatni, majd etilacetát és ecetsav 19:1 arányú elegyével eluálni. Ekkor megoszlásos kromatográfia alakul ki és először a katarantint, valamint a katarantinhoz hasonló oldékonyágú és polaritású alkaloid eluálódik, majd tiszta etilacetátra váltva az eluciót - miközben a gyengén savas környezet még fennmarad az adszorbensen - eluálódnak a vindolin és az ehhez hasonló tulajdonságú alkaloidok. Felismertük továbbá azt is, hogy a katarantin; ez az ismert molekula, mely nemcsak hő - és oxigén - érzékeny, de fokozottan érzékeny már enyhén lúgos kémhatásra is. Ugyanakkor erősen szennyezett környezetéből is jól kristályosítható borkősavas formában, így viszonylag egyszerű módon 90% feletti tisztaságban szilárd termékként kinyerhető. Kísérleteinkben megállapítottuk azt is, hogy a vindolin-molekula érzékenysége miatt a vindolin tisztítási lépéseit is olyan módon megválasztott rendszerben kell végezni, ahol a pH-érték mindig 7-es érték alatt maradjon. A találmány eljárás dimer indol-alkaloid-keverék, katarantin és vindolin szétválasztására és kinyerésére bázis vagy savaddíciós só formájában, rózsameténg (Vinca rosea L.) drogjából származó, az összes alkaloidot tartalmazó sűrítményből vagy száraz maradékból, a dimer indol-alkaloidok szulfát-só formájában történő elválasztása, a kapott, főként katarantint és vindolint tartalmazó anyalúg extrakciós és/vagy oszlop-kromatográfiás úton való feldolgozása, a kapott katarantint és vindolint már külön- külön tartalmazó oldatok tisztítása, majd a katarantin és vindolin izolálása útján, olyan módon, hogy a kiindulási anyagként használt, összes alkaloidot tartalmazó sűrítményből vagy száraz maradékból a dimer indol-alkaloidok szulfát-sóját az alkaloidok tömegére számított 1-10 tömeg% 3,5-nél magasabb pK- értékű savat, előnyösen ecetsavat tartalmazó, kénsavas etanollal választjuk le, a kapott, főtömegében katarantint és vindolint tartalmazó anyalúgból a) a katarantint és vindolint oszlopkromatográfiás módszerrel, előnyösen szilikagél adszorbensről, sorrendben kloroform-, 19:1 arányú etil-acetát: ecetsav-, majd etilacetát-eluenssel szétválasztjuk, a katarantinban dűs frakcióból a katarantint tartarát-só formájában leválasztjuk, majd kívánt esetben szulfát-só formájában, a vindolint tartalmazó szerves fázisból a vindolint bepárlás és szilikagél-oszlopon végzett kromatográfiás tisztítás után oldószerből, elő-nyösen dietiléterből izoláljuk, vagy b) a katarantint és vindolint extrakciós módszerrel klórozott szénhidrogén vagy klórozott szénhidrogénelegy, előnyösen széntetraklorid-diklóretán 3:1-1:1 térfogatarányú elegy és víz fázisai között pH-6,9- 7,1 értéken megosztva tisztítjuk, majd a kapott szerves fázist 1:1-3:1 térfogatarányban 5-25 tömeg% borkősavat tartalmazó vízzel extraháljuk, a vizessavas fázisban feldúsult katarantint tartarát-só formájában leválasztjuk, majd kívánt estben szulfát-só formájában izoláljuk, a vindolint tartalmazó szerves fázisból a vindolint bepárlás és szilikagél-oszlopon végzett kromatográfiás tisztítás után oldószerből, elő-nyösen dietiléterből izoláljuk. A találmány szerint tehát úgy járunk el, hogy az ún. nyers terméket (melyet például a 193 761 számú magyar szabadalmi leírás szerint állíthatunk elő) etanolban oldjuk, majd ecetsavat adunk a rendszerhez és kénsavas etanollal a dimer indol-alkaloidok szulfát-sóját leválasztjuk. A szulfátképzés anyaglúgját vízzel hígítjuk, és egy előnyös változat szerint a kénsav-tartalmat semlegesítjük, az oldathoz borkősavat adunk, amjd a monomereket kloroformba visszük át és kromatográfiás módszerrel szétválasztjuk, a katarantin-, vindolin-, és társalkaloidjait tartalmazó frakciókat ecetsavig pároljuk be, majd éteres közegben borkősavval a katarantin sóját képezzük és kristályosítjuk a katarantin tartarátot. Kívánt esetben tovább tisztítva szulfát-sót képezünk belőle, a vindolin tartalmú frakciókat szintén ecetsavig sűrítjük be, majd benzolból semlegesítés után a vindolin bázist kristályosán kinyerjük. Különösen ipari méretben bizonyult előnyösnek az a módszer, amelynél a dimer-leválasztás anyalúgjának lúgos (ammónium-hidroxidos) semlegesítése után klórozott szénhidrogénnel, előnyösen széntetraklorid-diklóretán eleggyel extrakciót végzünk, majd a katarantint és vindolint a két fázisból izoláljuk. A szerves oldószert gyenge sav vizes oldatával az esetlegesen visszamaradó dimertől mentesítjük, majd a kivonatot - mely vindolinban előnyösen feldúsult - szárítjuk, besűrítjük, majd szilikagél-oszlopon savanyú közegben klórozott szénhidrogén- eluenssel kromatografáljuk. Az egyes frakciókat egyesítjük, bepároljuk, és a kívánt terméket izoláljuk. A katarantint tartalmazó fázist borkősavval kezeljük, az erősen bázikus anyagok a borkősavas oldatban maradnak, a szinte teljesen kivált katarantin-tartarát pedig - a kiindulási anyagtól függően - 96-98%-osra tisztul. A kapott katarantin-tartarátból bázisfelszabadítás és etanolos-kénsavas szulfátképzéssel 2% alatti szennyezettségű katarantin-szulfáthoz juthatunk. Amennyiben a katarantin-szulfátot még tovább akarjuk tiszítani, hússzoros diklór-metán:matanol-l:lben célszerű oldani, majd a kiindulási anyag'súlyára számított ötszörös térfogatig bepároljuk, az oldatot 1 napig kristályosítjuk, és a kivált kristályokat izoláljuk. Ilyen módon 0,5% alatti szennyezettségű katarantinszulfáthoz juthatunk. A vindolin ecetsavas sűrítményét benzolban oldjuk, a benzolos oldatot vizes nátrium-hidrogén-karbonáttal ecetsav-mentesítjük, derítjük, szárítjuk, majd éterből kristályosítjuk. Az anyalúgot szárazra pároljuk, majd szilikagélen oszlopkromatografáljuk. A szárazmaradékból a vindolint éterrel felvesszük és állás után kristályosítjuk. A találmány szerinti eljárás legnagyobb előnye az, hogy ipari méretben, nagy tisztaságban, igen jó hatás5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
