202761. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabilizált eritropoietin-készítmények előállítására
HU 202761B félék, főleg polietilén-szorbitán-laurát (Tween 20 vagy 80) vagy szorbitán-trioleát (span 35 vagy 80) vagy glicerin-olajsav-poliglikoléter (LabrafilR) megfelelők, de más elviselhető anyagok is ugyanúgy egyenértékűen használhatók. Ugyancsak bevált, hogy a feldolgozás során a készítménybe, például az alkalmazott fémeszközökből, óhatatlanul bekerülő nehézfémionoknak az EPO-ra gyakorolt befolyásának csökkentésére még valamilyen oldható kalciumsó 0,01-5 g/1 töménységű oldatát, előnyösen körülbelül 0,02-0,2 g/1 töménységű kalcium-klorid oldatot adunk. Használhatók más fiziológiásán elviselhető komplexképzők, például citrát, EDTA, NTA, pantotenát is. Oldószerként injekciós célra megfelelő tiszta vizet használunk, amelyhez az izotóniás koncentráció beállítására még 0,5-10 g/1 nátrium-kloridot vagy megfelelő anyagokat, például mannitot, szorbitot stb. adunk. A találmány szerinti készítmények előállítása céljából az összes segédanyagot a szükséges menynyiségben vízben oldjuk, hozzákeverjük az EPO- preparátumot, amelynek körülbelül 100.000- 200.000 egység/mg protein aktivitásúnak kell lennie, sterilre szűrve a megfelelő ampullákba töltjük, lefagyasztjuk, és alacsony hőmérsékleten kíméletesen liofüizáljuk. A kapott készítmények nitrogén atmoszférában 0 °C-on 2 évig és szobahőmérsékleten 1 végig eltarthatok. Vízzel való újraoldáskor néhány másodperc alatt zavarosodás nélkül feloldódnak, és így vagy közvetlenül intravénásán vagy intramuszkulárisan injektálhatok, vagy izotóniás oldatokkal (például konyhasóoldattal) való hígítás után infundálhatók. A lefagyasztási folyamatnak különleges jelentőség jut. A segédanyagok fajtáját és mennyiségét úgy választjuk meg, hogy a lefagyasztandó oldat eutektikus pontja -50 *C és 30 *C között legyen. Egy számítógépvezérelt optimalizálási program segítségével a következő optimális körülményeket állapítottuk meg a liofilizálás 3 fázisa részére: Lefagyasztási idő 12-14 óra—40 *C-on; Főszárítás: anyaghőmérséklet 010 ’C, nyomás 10*1 mbar, idő 48-60 óra; Utószárítás: anyaghőmérséklet +20 °C, nyomás 10'3 mbar, idő 4-6 óra. A fagyasztva szárítás során lényeges, hogy egy Ap-mérőberendezéssel, valamint vezetőképességméréssel megállapítsuk, mikor fejeződik be a főszárítás, hogy a liofüizálandó termék ne túl gyorsan melegedjen fel, és elkerüljük a lefagyasztott oldat felengedését és az ezzel együtt járó aktivitásveszteséget. Az alkalmazott segédanyagokat úgy kell kiválasztani, hogy egy egyenletesen strukturált liofilizálandó jégtest jöjjön létre, és a liofilizálás alatt egy porózus vázat (pogácsát) kapjunk, amelyből lehetővé válik a jég optimális szublimációja, mindenekelőtt a főszárítás végénél is. Az utószárítás, amit előbb említettünk, csak +20 °C-on megy 4-6 óra hosszat. Ez a kíméletes kezelés azért fontos, mivel különben aktivitásveszteség lép fel a liofüizálandó anyagnál. Az így liofüizált termékek víztartalma Karl Fischer meghatározással rendszerint körülbelül 2-5%. 3 Ez a maradék víztartalom azon segédanyagokfajtájától és mennyiségétől függ, amelyeket az illető receptúrában használunk. A stabüizált EPO vizes oldatai közvetlenül is letölthetők ampullákba, és liofüizálás nélkül használatra kész formában forgalomba hozhatók. Az eltarthatóság azonban a liofüizátummal szemben 0 *C-on körülbelül 1 évre rövidül, szobahőmérsékleten pedig néhány hónapra. A következő példák az előbb vázoltak részletesebb szemléltetésére szolgálnak: 1. példa 2000 egységes eritropoietin száraz injekciós készítmény (35.000 üveghez szükséges adag) Egy sterü, keverővei ellátott, 100 literes kettős köpenyű készülékben oldatot készítünk a következő 4 segédanyagokkal: karbamid 700,0 g nátrium-klorid 70,0 g Tween 20 7,0 g nátrium-hidrogén-foszfát. .IH2O 38,4 g dinátrium-hidrogén-foszfát. 2H2O 350,0 g kalcium-klorid. 2H2O 8,4 g glicin 105,0 g L-leucin 140,0 g L-izoleucin 140,0 g L-treonin 35,0 g L-glutaminsav 35,0 g L-fenUalanin 70,0 g injekciós minőségű vízzel kiegészítve 70,0 literre. 30 liternyi üyen segédanyag-oldathoz hozzáadunk214,3 ml 140.000 egység/mlEPO-titerű eritropoietin nyersanyag-oldatot, és feltöltjük 35 liter végtérfogatra, majd összekeverjük. A maradék segédanyag-oldattal átöblítjük a szűrőrendszert. Az oldatot 0,2 pjn pórusméretű membránszűrőn sterilre szűrjük. A sterilre szűrt oldatot aszeptikus körülmények között 1 ml-enként injekciós üvegekbe töltjük, és a következő feltételek mellett egy liofüizáló berendezésben fagyasztva szárítjuk: lefagyasztási idő: 12-14 óra -40 *C-on; főszárítás: anyaghőmérséklet +10 ”C, nyomás 10’ mbar, idő: 48-60 óra; utószárítás: anyaghőmérséklet +20 °C, nyomás 10’3 mbar, idő: 4-6 óra. Ily módon voluminózus nyütpórusú injekciós szárazanyagot nyerünk, amely jégszekrényben legalább 2 évig, szobahőmérsékleten legalább 1 évig tárolható, és 2 ml injekciós minőségű vízben néhány órán belül zavarosodás nélkül és üledékmentesen oldódik. 2. példa 200 egységes eritropopoietin liofüizátum (35.000 üveghez szükséges adag) eritropoietin 46,7 ml- 7Mio egység nátrium-klorid 100,0 g Tween 20 10,0g nátrium-dihidrogén-foszfát. .IH2O 155,0 g 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
