202761. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabilizált eritropoietin-készítmények előállítására
HU 202761B 5 6 dinátrium-hidrogén-foszfát. .2H20 500,0 g kalcium-klorid. 2H20 10,0 g karbamid 1000,0 g L-leucin 150,0 g L-treonin 120,0 g L-fenüalanin 165,0 g injekciós minőségű vízzel kiegészítve 70,0 literre A segédanyagokat feloldjuk a 70 liter injekciós minőségű vízben, és utána az oldatot két 35 literes részre osztjuk. Az első 35 litert elegyítjük a szükséges mennyiségű EPO-hatóanyaggal, A második 35 litert a szűrőrendszer átöblítésére használjuk. A maradék oldatot egy 0,2 mm pórusméretű membránszűrőn sterilre szűrjük. A sterilre szűrt oldatot aszeptikus körülmények között 1 ml-es részletekben injekciós üvegekbe töltjük, és az 1. példában megadottakhoz hasonló körülmények között liofilizál juk. így fehér, porózus, 2 ml vízben jól oldódó liofilizátumot kapunk, amely jégszekrényben 2 évig, szobahőmérsékleten pedig 1 évig tárolható nagyobb aktivitásveszteség nélkül. 3. példa 1000 egységes eritropoietin liofilizátum (35.000 üveghez szükséges adag) eritropoietin 233,33 ml-35 Mio egység nátrium-klorid 100,0 g Tween 20 12,0 g nátrium-dihidrogén-foszfát. .IH2O 140,0 g dinátrium-hidrogén-foszfát. .2H20 450,0 g kalcium-klorid. 2H2O 10,0 g karbamid 700,0 g glicin 1050,0 g L-Ieucin 92,0 g L-glutaminsav 103,0 g L-fenilalanin 115,5 g Injekciós minőségű vízzel kiegészítve 70,0 literre A segédanyagokat feloldjuk 70 liter injekciós minőségű vízben, és utána két 35 literes részre osztjuk. Az első 35 litert a szükséges mennyiségű EPO- hatóanyaggal elegyítjük. A második 35 litert a szűrőrendszer átöblítésére használjuk. A visszamaradó oldatot 0,2 pm pórusméretű membránszűrőn sterilre szűrjük. A sterilre szűrt oldatot 1 ml-es adagokban injekciós üvegekbe töltjük, és az 1. példában megadottakkal azonos körülmények között liofilizáljuk. íly módon fehér, porózus, 2 ml vízben jól oldódó liofilizátumot kapunk, amely jégszekrényben 2 évig vagy szobahőmérsékleten 1 évig tárolható nagyobb aktivitásveszteség nélkül. 4. példa 500 egységes eritropoietin liofilizátum (35.000 üveghez szükséges adag) eritropoietin 116,67 ml-17,5 Mio egység nátrium-klorid 70,0 g Tween 20 7,0 g nátrium-dihidrogén-foszfát. .IH2O 38,5 g dinátrium-hidrogén-foszfát. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 .2H2O 490,0 g kalcium-klorid. 2H2O 5,6 g karbamid 840,0 g L-leucin 92,4 g L-glutaminsav 105,0 g L-fenilalanin 119,0g Injekciós minőségű vízzel kiegészítve 70,0 literre A segédanyagokat feloldjuk 70,0 liter injekciós minőségű vízben, és utána két 35 literes részre osztjuk. Az első 35 litert elegyítjük a szükséges mennyiségű EPO-hatóanyaggal. A második 35 litert a szűrőrendszer átöblítésére használjuk. A fennmaradt oldatot 0,2 pm pórusméretű membránszűrőn sterilre szűr jük. A sterilre szűrt oldatot aszeptikus körülmények között 1 ml-es adagokban injekciós üvegekbe töltjük, és az 1. példában megadott körülmények között liofüizáljuk. így fehér, porózus, 2 ml vízben jól oldódó liofilizátumot kapunk, amely 2 évig jégszekrényben vagy 1 évig szobahőmérsékleten nagyobb aktivitásveszteség nélkül tárolható. 5. példa 750 egységes eritropoietin liofilizátum (35.000 üveghez szükséges adag) eritropoietin 175,0 ml-26,25 Mio egység nátrium-klorid 100,0 g Tween 20 12,0 g nátrium-dihidrogén-foszfát. .IH2O 140,0 g dinátrium-hidrogén-foszfát. .2H20 450,0 g kalcium-klorid. 2H2O 10,0g karbamid 700,0 g glicin 1250,0 g L-izoleucin 98,0 g L-glutaminsav 130,0 g L-fenilalanin 145,0 g injekciós minőségű vízzel feltöltve 70,0 literre A segédanyagokat feloldjuk 70 liter injekciós minőségű vízben, és utána két 35 literes részre osztjuk. Az első 35 litert a szükséges mennyiség EPO- hatóanyaggal elegyítjük. A második 35 litert a szűrőrendszer átöblítésére használjuk. A fennmaradó oldatot 0,2 pm pórusméretű membránszűrőn sterüre szűrjük. A sterilre szűrt oldatot aszeptikus körülmények között 1 ml-es részletekben injekciós üvegekbe töltjük, és az 1. példában megadottakkal azonos körülmények között liofüizáljuk. így fehér, porózus, 2 ml vízben jól oldódó liofüizátumot kapunk, amely 2 évig jégszekrényben vagy 1 évig szobahőmérsékleten nagyobb aktivitásveszteség nélkül tárolható. 6. példa Különböző stabüizátorok hatásosságának vizsgálatára egy 1000 EPO-egység/ml-es standard-receptúrát, amely főstabüizátorként karbamidot tartalmaz, polivinilpirrolidon/fehérjével, Uletve különböző aminosavakkal elegyítünk, és a termékeket liofUizál juk. Az eredményeket az 1. táblázatban összesítjük. Az EPO stabüitását a liofilizátum 6 hétig 35 *C- on, illetve 0 °C-on végzett tárolása után G. Krystal 4
