202596. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-aciloxi-biciklo [3.3.0] oktán-7-on-2-karbonsav-észterek recemát-hasítására sztereospecifikus enzimes vagy mikrobiológiai acilát-hidrolízissel
7 HU 202 596 B 8 tatunk az A-3.a) példánál leírt körülmények között, és a nyersterméket szilikagélen hexán/etil-acetát eleggyel kromatografáljuk. Ilyenképpen 1,78 g terméket kaptáik színtelen olajként A-ll. példa 7.7- (2,2-Dimetil-trimetiléndioxi)-cis2-biciklo[3.3.0] oktán-3-on-2-karbonsav-benzil-észter 2.5 g 7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktán-3-on-2-karbonsav-metil-észter 50 ml toluollal készített oldatához 1,2 ml benzilalkoholt és 217 mg 4-(dimetil-amino)-piridint adunk, és az oldatot 8 óra hosszat fonatjuk visszafolyató hűtő alatt Ezt kővetően lehűtjük 25 ‘C-ra, telített nátrium-klorid oldatot adunk hozzá, diklór-metánnal extraháljuk, ezt nátrium-klorid-oldattal mossuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiával tisztítjuk. Hexán/etil-acetát (8:2) eleggyel eluálva 2,6 g cím szerinti vegyülethez jutunk, színtelen kristályos anyagként. Etil-acetát/hexán elegyból végzett átkristályosítás után 1,8 g színtelen, kristályos, 78 ‘C olvadáspontú anyagot kapunk. A-12. példa 7.7- (2,2-Dimetil-trimetiléndioxi)-3a-hidroxi-cisz-biciklo-[3.3.0] oktán-2$-karbonsav-benzil-észter 1.5 g 7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktán-3-on-2-karbonsav-benzil-észtert (A-ll. példa) oldunk 25 ml metanolban visszafolyató hűtó alatt végzett forralás közben. Oldódás után az oldatot lehűtjük -40 *C-ra, hozzáadunk 470 mg nátrium-bórhidridet, és 1 óra hosszat-40 *C-on keverjük. Hozzáadunk 3,8 ml acetont, 1 óra hosszat keverjük -40 *C-on, körülbelül 0. 7 ml ecetsavval semlegesítjük, és vákuumban bepároljuk. A maradékot 100 ml vízzel elegyítjük, diklór-metánnal extraháljuk, ezt nátrium-kloríd-oldattal mossuk, magnézium-szulfáttal szárítjuk, és vákuumban bepároljuk. Szilikagélen hexáa/etil-acetát (6:4) eleggyel végzett kromatografálás után 1,4 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajként. Az infravörös spektrum (CHC13) adatai: 3600, 2960, 2870,1722,1447 cm'1. A-13. példa 7.7- (2,2-Dimetil-trimetiléndioxi)-3a.-benzoiloxi-cisz-biciklo [3.3.0] oktán-2$-karbonsav-benzil-észter 1,35 g 7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-3a-hidroxi-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-benzil-6szter (A-12. példa) 14 ml diklór-metánnal készített oldatához 0 *C-on hozzáadunk 1,4 ml pirídint és 0,62 ml benzoil-klorídot, majd 0,5 óra hosszat 0 *C-on és 2 óra hosszat 25 *C-on keverjük. Utána hozzáadunk 0,2 ml vizet, 1 óra hosszat keverjük, diklór-metánnal hígítjuk, egymás után vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és vízzel mossuk. Ezután magnézium-szulfáton szárítjuk és a bepárlási maradékot szilikagélen kromatografáljuk. Hexán/etil-acetát (3 :2) eleggyel eluzálva 1,36 g cím szerinti vegyületet kapunk színtelen olajként. Az infravörös spektrum (CHC13) adatai: 2960, 2870, 1725,1603 cm-1. A következő kiviteli példák a találmány szerinti eljárás szemléltetését szolgálják. 1. példa 3 g (±)-3a-acetoxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-kaibonsav-metil-0sztert (7. képlet) oldunk 100 ml etanolban, és egy 2 literes Erlenmeyer-lombikban 1,5 g Alcaligenes-ből származó lipáz-PL (Meita Sangyo cég) 1 liter 7 pH-jú 0,1 mólos foszfátpufferrel készített oldatával elegyítjük. A szuszpenziót körkörös rázóasztalon 30 *C-on rázatjuk, közben a reakció menetét folyamatosan vett minták analízisével követjük. 21 órás reakcióidő után a bevitt szubsztrát 50%-a átalakul. Az elegyet 3-szor extraháljuk metil-izobutil-ketonnal, az extraktumokat egyesítjük, vákuumban szárazra bepároljuk és az átalakulatlan észter-acilát elválasztása céljából szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. (Diklór-metán diklór-metán/10% aceton gradiens). Ily módon 1,15 g enantiomertiszta (+)-3a-hidroxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo[3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-metil-0sztert kapunk, amely hexán/diizopropil-éter elegyből végzett kristályosítás után 65-66 ‘C-on olvad. [a] d = +26,2* (c = 1,255; kloroform). 2. példa 300 mg (±)-3a-acetoxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-metil-észtert (1 képlet) szuszpendálunk 100 ml 7 pH-jú 0,1 mólos foszfátpufferben. Hozzáadunk 750 mg Candida cyclindracea-ból származó lipáz My-t (Meito Sangyo cég), és a szuszpenziót Ultra-Turrax-szal homogenizáljuk. Utána az elegyet szobahőmérsékleten körkörös rázóasztalon rázatjuk. 30 óra reakcióidő elteltével a szubsztrát 50%-ig átalakul. Ekkor az elegyet 3-szor extraháljuk dietil-éterrel, az extraktumokat egyesítjük, és vákuumban szárazra bepároljuk. A kapott maradékot az át nem alakult kiindulási anyag elválasztása céljából szilikagéllel töltött oszlopon diklór-metán diklór-metán/5% aceton oldószergradienssel eluálva kromatografáljuk. Ily képpen 105 mg (+)-3a-hidroxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [33/)] oktän-2ß- - karbonsav-metil-észtert karunk, amelynek olvadáspontja hexánból végzett átkristályosítás után62-63 *C, és fajlagos forgatása: [a] jjf = +25* (c = 1,01; kloroform). Autentikus referencianyaggal való összehasonlító mérés útján erre 93,6%-os enantiomer-túlsúlyt állapítottunk meg. 3. példa 300 mg (±)-3a-acetoxi-7,7-(23-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-metil-észtert (1 képlet) oldunk etanolban, és hozzáadjuk 750 mg Rhizopusból származó „Saiken” lipáz (Nagase cég) 100 ml 7 pH-jú 0,1 mólos foszfátpufferrel készített szuszpenziójához. Rázógépen 28 *C hőmérsékleten való 96 óra rázatás után az elegyet metil-izobutil-ketonnal extraháljuk, az extraktumot szárazra bepároljuk, és szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. így 112 mg (+)-3a-hidroxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-ciszbiciklo [3.3.0] okuän-2ß-karbonsav-metil-0sztert kapunk, amelynek olvadáspontja 64-65 *C hexánból végzett átkristályosítás után. A fajlagos forgatás: [a] “ = = +23,8* (c = 1,02; kloroform). Az autentikus sztandarddal szemben végzett összehasonlító mérés alapján az enantiomer-felesleg 92,5% tisztaságú. 4. példa 300 mg (±)-3a-acetoxi-7,7-(2,2-dimetil-trimetiléndioxi)-cisz-biciklo [3.3.0] oktän-2ß-karbonsav-metil- - észtert (1 képlet) szuszpendálunk 100 ml 7 pH-jú 0,1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
