202591. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a BU-3420T antibiotikum, valamint ilyen antibiotikumot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
9 HU 202 591 B 10 való kezelés útján, fágokkal való kölcsönhatások útján -állíthatók elő. BU-3420T előállítása A találmány szerint a BU-3420T antibiotikumot a BU-3420T-t termelő Micromonospora chersina sp. nov. tenyésztésével, azaz a Micromonospora chersina M956-1 törzs (ATCC 53710), vagy annak valamilyen variánsa vagy mutánsa tenyésztésével, merített kultúrában, aerob körülmények között, vizes tápközegben állítjuk elő. A termelő organizmust asszimilálható szénforrást - például L-arabinózt, D-xilózt, szaccharózt, melibiózt, raffinózt vagy oldható keményítőt - tartalmazó tápközegben tenyésztjük. A tápközegnek asszimilálható nitrogénforrást - például hallisztet, peptont, szójalisztet, mogyorólisztet, gyapotmaglisztet vagy kukoricaáztató folyadékot - is kell tartalmaznia. A közegbe szervetlen tápsókat is adhatunk; ilyen sók lehetnek például a szokásos, nátrium-, kálium-, ammónium-, kalcium-, foszfát-, szulfát-, klorid-, bromid-, nitrát-, karbonát- és hasonló ionokat tartalmazó sók. A BU-3420T bármely hőmérsékleten termelhető, amelyen az organizmus kielégítően szaporodik: 18 *C- tól 49 ‘C-ig terjedő hőmérséklettartományban; előnyösen körülbelül 28 "C hőmérsékleten dolgozunk. A fermentációt lombikokban vagy különböző űrméretű laboratóriumi vagy ipari fermentorokban hajthatjuk végre. Ha a fermentációt tartályokban végezzük, akkor kívánatos egy vegetatív oltvány (inokulum) előállítása tápfolyadékban úgy, hogy a tenyésztőközeg kis térfogatát ferdeagaros vagy talajkultúrával vagy az organizmus liofilizált tenyészetével beoltjuk. Az így kapott aktív inokulumot aszeptikus körülmények között visszük át abba a fermentáló tartályba, ahol a BU-3420T nagy léptékű fermentációját végezzük. A vegetatív inokulum előállítására alkalmazott közeg lehet ugyanaz, mint amelyet a tartályban (tankban) alkalmazunk, vagy lehet attól különböző azzal a feltétellel, hogy abban az antibiotikumot termelő organizmus kedvezően szaporodik. A BU-3420T optimális termelődését általában körülbelül 3-4 napos inkubálási időtartammal érhetjük el. Az antibiotikum termelődését a papírlemezes-agardiffúziós próbával ellenőrizhetjük, aminek során vizsgálati organizmusként (tesztorganizmusként) 8,0 pH-értéken Bacillus subtilis-t alkalmazunk. A BU-3420T elkülönítése és tisztítása A BU-3420T a fermentléből a szokásos elkülönítési és tisztítási eljárásokkal - például oldószeres extrakcióval és kromatográfíával - izolálható. Az alábbi 4 példában a BU-3420T lényegében tiszta formában történő előállítására előnyös elkülönítési és tisztítási eljárást írunk le. A BU-3420T triacetátja úgy kapható, hogy a BU-3420T-t valamilyen acetilezőszerrel - például ecetsavanhidriddel közömbös (inert) szerves oldószerben acetilezzük. A BU-3420Tfizikai-kémiai tulajdonságai A BU-3420T kék színű, amorf, szilárd anyag, triacetátja narancsszínű tűs kristályokat alkot. A BU-3420T oldódik dimetil-szulfoxidban, dimetil-formamidban és dioxánban, kevéssé oldható kloroformban, etil-acetátban, metanolban és etanolban; vízben és n-hexánban oldhatatlan. Acetátja szerves oldószerekben, például kloroformban, metanolban és etanolban sokkal jobban oldódik. A BU-3420T összegképletét C3oH19N09-nek találtuk. Szerkezetét a mikroanalízisen kívül tömegszínképével, valamint a BU-3420T színképének összehasonlító elemzésével állapítottuk meg. A vegyület fizikai-kémiai adatait az 5. táblázatban összegeztük. A BU-3420T IR-színképe (lásd az 1. ábrát) 3420,3350,2930, 1660,1630,1587,1480,1385,1300,1280,1180 és 785 cm'-nél elnyelési sávokat mutat. Az 1630 cm'-nél mutatkozó karbonil-sáv kinoncsoportra utal. A BU-3420T 'H-NMR-színképe egy metilt (8 1,25 ppm), egy OCHr ot (3,79 ppm), három metint (3,55, 4,78 és 5,04 ppm), két olefines (6,05 és 6,07 ppm) és három aromás protont (7,62 x 2 és 8,03 ppm) mutat. D20 hozzáadására két további proton 8 9,41 és 12,37 ppm) eltűnik. 5. táblázat A BU-3420T fizikai-kémiai tulajdonságai BU-3420T Külleme: kék, amorf por op. (boml.) 208-210"C [a] d +270 * (c = 0,01, DMF) UVX_ nm (e)MeOH-ban: 240 (8300), 287 (váll), 395 (2600), 568 (4200), 597 (4100) 0,01 n Hcl + MeOH-ban: 239 (8300), 284 (váll), 394 (4000), 563 (3600), 600 (3300) 0,01 n NaOH + MeOH-ban: 216 (15500), 246 (23000), 274 (váll), 394 (3700), 597 (10200), 641 (10500) Összegképlet: C30H19NO9 Szekunder iontömegspektrum: M/z 538 (M+MT Vékonyréteg-kromatogramm: szilikagélen, xilol/metiletil-keton/metanol 5:5:1 térf./térf. arányú elcgyével kifejlesztve a BU-3420T Rrértéke 0,40. Szerkezetmeghatározás A BU-3420T UV-színképe közömbös oldatban abszorpciós maximumot mutat 240,287, 395, 568 és 597 nm-nél. Az elnyelés és alkálikus oldatban mutatkozó eltolódás az e-rodomicinon tulajdonságaihoz hasonlít [J. Antibiotics 33, 1331 (1980); és J. Antibiotics 33. 1341 (1980)]. A BU-3420T antibiotikum biológiai hatása A baktérium- és gombaellcnes hatások in vitro vizsgálata. A BU-3420T egyes baktériumok elleni minimális gátló koncentrációit (rövidítve: MIC-értékeit) agar-sorozat-hígításos módszerrel határoztuk meg. Tápagart (Eiken) és GAM-agar-táptalajt (Nissui) alkalmaztunk az aerob, illetve anaerob baktériumok esetében. A 6. táblá-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
