202553. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diamino-monokarbonsavból álló izopolipeptidek és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint poliizolizint tartalmazó növényvédőszer
HU 202553B amino-védőcsoport, előnyösen R1 jelentése Z, Cl- Z, Fmoc, jelentése Boc, Bpoc. Aoc, Adc, Ddz, Poc, Rá jelentése ismert aktív észter csoport, előnyösen Np, Tcp, Pcp, és a szubsztituensek jelentése a (II) és (TU) általános képletű vegyűletekben 5 megegyező, és a (H) és (EH) általános képletű vegyületek konfigurációja azonos. Az előállított izopeptidek analízisénél modem elválasztástechnikai módszereket (HPLC, OPLC, IEF) és szerkezetvizsgálati módszereket (például 10 MS, NMR) használtunk. Ezek a vizsgálatok azt igazolták, hogy a kívánt anyagokat sikerült előállítanunk. A biológiai vizsgálatok alábbiakban ismertetett eredményei azt igazolják, hogy a találmány szerinti 15 eljárással előállított, L-konfigurációjú izopolipeptidek és sóik előnyös biológiai aktivitással rendelkeznek szemben az ismert eljárásokkal előállított termékekkel. A találmányunk szerinti eljárás előnyeit a Kush- 20 waha illetve Mathur, továbbá Hull által publikált szintézisekkel szemben a következőkben foglaljuk össze:- Ha optikailag tiszta izomerekből indulunk ki, akkor az azoknak megfelelő konfigurációjú, kis po- 25 lidiszperzitású polimert kapjuk.- Polikondenzációra közvetlenül alkalmas oligomert nyerünk úgy, hogy elkerüljük az előbbiekben említett hidrolízis lépést. így kiküszöböljük a racemizációt, ami döntő jelentőségű a biológiai hatás 30 szempontjából, továbbá meglepően kedvezőbb mólsúlyeloszlású (kis polidiszperzitású) terméket kapunk, ami szintén előnyös a kívánt biológiai hatás elérése szempontjából.- Magasabb hozamot érünk el, a köztitermékek 35 és a végtermékek optikai tisztasága nagyobb. Mind a köztitermékek, mind a végtermékek jól kristályosodó anyagok, ennél fogva jól izolálhatok.- Az egyes peptidkapcsolási lépések lényegesen rövidebb idő alatt mennek végbe. 40- Az általunk legelőnyösebbnek talált eljárásváltozatban alkalmazott amino-védőcsoport kombinációval elkerülhetjük a savamidkötésben részt vevő aminocsoport katalitikus hidrogénezéssel végzett felszabadítását. Ez az ipari megvalósítás szempont- 45 jából előnyös. Poliizolizin és poliizoomitin esetén ugyanakkor az is előnyös, hogy a biológiai hatás szempontjából kedvező móltömegű izopolipeptid 7 Z-vel védett köztitermékét a polikondenzáció folyamán gél formájában kapjuk meg, ami könnyebben izolálható a3oc-cal védett, oldatban lévő védett polimernél. A találmány s zerinti eljárással előállított vegyúletek biológiai hatását in vitro és in vivo körülmények között vizsgáltuk, eredményeinket a következőkben ismertetjük. A tumorgátló hatást állati tumortörzsek, a vírusgátló hatást növényi vírus felhasználásával vizsgáltuk. Kísérleteinkben meglepően hatékonynak bizonyultak a 40-200 tagszámú (5500-25600 közötti móltömegű) poliizo-L-lizinek, amelyek közül is kiemelkedően jó hatást mutattak a 60-120 tagszámú (10200-15400 közötti móltömegű) termékek. Tumorgátló hatás vizsgálata A sejtproliferációt befolyásoló vegyületek hatásának vizsgálata általában in vitro, sejttenyészetek és in vivo átoltható állati daganatok felhasználásával történik. Ezért a szóban forgó anyagokat is egy humán erythroleukaemia (K-562) sejttenyészet (eredete: Karolinska Institut, Stockholm) és négy átoltható egér daganat (Li 210 lymphoid leukaemia, P388 macrophag eredetű tumor, Ehrlich carcinoma, Lewis-féle tüdőrák) felhasználásával teszteltük. Az L1210, a P388 és az Ehrlich tumor esetében paraméterként az állatok túlélése szolgált, míg a I^ewis Lung Tumor esetében a daganat által létrehozott tüdő, illetve májáttétek számát, nagyságát határoztuk meg a kezelt és kezeletlen kontroll egerekben. A vizsgálatokat a következő injekciós oldat felhasználásával végeztük: 10 ml fiziológiás NaCl-oldatban oldott 50 mg vizsgált anyag, sterüre szűrve. A vizsgált anyagokat a következőképpen jelöltük: SZTP: a találmány szerinti eljárással előállított poliizo-L-lizinek SZTO: a találmány szerinti eljárással előállított poliizo-L-omitin H-17: Hull et al. eljárásával előállított poliizo-L- lizin K-17: Kushwaha et al. eljárásával előállított poliizo-L-lizin A-3: poli-L-lizin HBr-só (kereskedelmi forgalomban kapható a-polilizin) A vizsgált anyagok fizikai jellemzőit az I. táblázatban foglaljuk össze. 8 I. táblázat A biológiai vizsgálatokban felhasznált vegyületek jellemzői Anyag Átlagmóltömeg ±200 Papír-* kromatográfiás tisztaság Optikai forgató kép. [aj °D (c=2;H20) Pol.fok R ± 2 SZTP-14: poli(e-L-lizin-HBr), átcsapással tisztított! 12.700+ tiszta +32,4° 99 SZTP-15: poli(e-L-lizin-HBr), gélszűréssel tisztított (H2O) 11.600 tiszta +31,9° 90 5
