202553. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diamino-monokarbonsavból álló izopolipeptidek és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint poliizolizint tartalmazó növényvédőszer
HU 202553B csoportjain ismert védőcsoportokkal védett, az előbbiekkel azonos vagy azoktól eltérő D vagy L konfigurációjú diamino-monokarbonsavat, és kívánt esetben az co-amino-védőcsoport lehasítását és a kapcsolást továbbfolytatjuk, majd az w-aminocsoportján szabad di-, dekapeptidet ismert módon polikondenzáljuk, a peptidkötésben részt nem vevő aminocsoportok védőcsoportjait lehasítjuk, és kívánt esetben az izopolipeptidet ismert módon sóvá alakítjuk, vagy a savaddíciós só formában kapott izopolipeptidet sójából felszabadítjuk, és kívánt esetben másik sóvá alakítjuk. A találmány szerinti eljárásban a kiindulási diamino-monokarbonsavak aminocsoportjait a peptidkémiában ismert, egymástól eltérő, egymás mellől szelektíven eltávolítható védőcsoportokkal védjük. A peptidkötésben részt nem vevő aminocsoport védelmére előnyösen Z, Cl-Z, Fmoc csoportot, az cnhelyzetű aminocsoport védelmére előnyösen Boc, Bpoc, Aoc, Adc, Ddz, Poc csoportot alkalmazunk. A karboxilcsoport védelmére és egyben aktiválására ismert aktív észter védőcsoportot, előnyösen ONp, OTcp, OPcp csoportot használunk. A megfelelően védett aminosavak kapcsolását ismert módon, vegyes anhidrides, azidos vagy szuperaktív észteres módszerrel végezzük. Szuperaktív észteres kapcsolás esetén az aminocsoportjain a fentiek szerint védett diamino-monokarbonsav ismert szuperaktív észterét, előnyösen OPfp vagy OBt észterét kapcsoljuk az w-aminocsoportján szabad, a peptidkötésben részt nem vevő aminocsoportján és karboxilcsoportján a fentiek szerint védett diamino-monokarbonsavhoz. A találmány szerinti legelőnyösebb eljárásváltozatban az w-aminocsoportján szabad és a peptidkötésben részt nem vevő aminocsoportján Z-vel védett, karboxilcsoportján p-nitro-fenil-észter-csoporttal védett diamino-monokarbonsavhoz az o>aminocsoportján Boc-cal, a peptidkötésben részt nem vevő aminocsoportján Z-vel védett diaminomonokarbonsavat vegyes anhidrides módszerrel kapcsolunk, az így kapott dimer oj-amino-védőcsoportját lehasítjuk, és az co-aminocsoportján szabad dimerhez vegyes anhidrides módszerrel kapcsolunk az tó-helyzetben Boc-cal, a peptidkötésben részt nem vevő aminocsoportján Z-vel védett diaminomonokarbonsavat, az így kapott trimer w-helyzetű Boc csoportját lehasítjuk, majd az co-aminocsoportján szabad tripeptidet ismert módon polikondenzáljuk. A legelőnyösebbnek bizonyult vegyes anhidrides kapcsolási módszer szisztematikus vizsgálatával a következő reakciókörülményeket találtuk a legmegfelelőbbnek: a) oldószer: acetonitril, THF, DM, diklór-metán; b) anhidridképző reagens: klór-hangyasav-etilészter, klór-hangyasav-izobutil-észter, EEDQ, IIDQ; tercier bázis: trietü-amin, diizopropil-etilamin, N-metil-morfolin; C) aktiválási idő és hőmérséklet: 10-30 perc, - 10 °C és -20 °C között; d) az aminokomponens felszabadítása sójából: trietil-aminnal vagy diizopropil-aminnal a reakcióelegyben. Így 60-80%-os átlagtermeléssel állítottuk elő a 5 tiszta végterméket. A di-, tri-, dekapeptideket ismert módon, oldószer és bázis jelenlétében polikondenzáljuk (ld. Houben-Weyl: Methoden der organischen Chemie, ed. E. Müller IG. Thieme Verlag, Stuttgart, 1974/, XV/2, ed. E. Wünsch: Synthese von Peptiden p. 408- 423, E. Schröder, K. Lübke: The Peptides I-IL, Acad Press, New York, 1966, MA. Stahmann: Polyamino Acids, Polypeptides, and Proteins, The Univ. Wisconsin Press, Madison, 1962). A végtermék polimerizációfok tartományát a fenti irodalmakból ismert módon, a di-, tri-, dekapeptid koncentrációjának, a reakció hőmérsékletének és idejének, továbbá az oldószer megfelelő megválasztásával állíthatjuk be. Oldószerként előnyösen DMSO-t, DMF-et vagy hexametil-foszforsavtriamidot (HMPT), bázisként előnyösen trietilamint, N-metil-morfolint vagy diizopropil-etüamint használunk, az oligomerből 200- 500mmól/dm3 koncentrációjú oldatot készítünk, és a reakciót szobahőmérsékleten 14-180 órán át végezzük. A biológiai hatás szempontjából különösen kedvező, 60-120 tagszámú izopolipeptideket az oligomerek 40-150 órán át végzett polikondenzációjával állíthatjuk elő. A biológiai hatás szempontjából legkedvezőbb (I) általános képletű izopolipeptidek előállítására legelőnyösebben úgy járunk el, hogy a reakcióban részt nem vevő aminocsoport védelmére Z védőcsoportot alkalmazunk, az oligomerből 350-450 mmól/dm3 koncentrációjú oldatot készítünk pl. DMSO-val, és a polikondenzációt teljes gélesedésig végezzük. Ha oldószerelegyet (pl. DMSO és HMPT 1:1 arányú elegyét) használunk, a teljes gélesedést elkerüljük, és a reakcióelegy oldatban tartásával a polikondenzációt 150-180 órán át végezzük, így magasabb tagszámú polimert kapunk. A 20-60 tagszámú izopolipeptideket 24-40 órán át végzett polikondenzációval állítjuk elő. A fentiek szerint mind a móltömeg, mind a móltömegeloszlás szempontjából jól reprodukálhatóan állíthatjuk elő a kívánt terméket, melynek biológaii hatása szintén jól reprodukálható. A végterméket ismert módon, előnyösen kicsapással és mosással (pl. vízzel, éterrel), ezt követően gélkromatográfiával, ismételt átcsapással vagy dialízissel tisztítjuk. A találmány szerinti eljárással mind L-, mind D- konfigurációjú diamino-monokarbonsavakból felépülő homo- és szekvencia izopolipeptideket állíthatunk elő a kiindulási vegyületek eredeti konfigurációját megtartva, ezek között olyanokat is, amelyekben az L- és D-konfigurációjú aminosavak vegyesen fordulnak elő. A találmány szerinti eljárással a peptidkötésben részt nem vevő aminocsoportokon védett izopolipeptideket állítunk elő. A védőcsoportokat ismert módon lehasítjuk, és így az izopolipeptideket savaddíciós sójából felszabadítjuk, és kívánt esetben egy másik sóvá alakítjuk. A fentiek szerint állítjuk elő az (I) általános képletű izopolipeptideket és sóikat is úgy, hogy kiindulási anyagokként valamely (II) és (ül) általános képletű vegyületeket alkalmazunk. A (II) és (ül) általános képletű vegyületekben m és 0,1,2,3, R1 és R2 jelentése egymás mellől szelektíven eltávolítható 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
