202546. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidoglükán monomer N-acil-származékainak és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítményeknek az előállítására
HU 202546B 5 6 I. táblázat folytatása PGM-N-acil-származékok immunológiai aktivitása N Lép tömege t/p Lép limfo- t/p citák száma PFC t/p PFC/ml t/p limfocita 9. példa kontroü 16 117,4 + 18,71 45,9 ±10,47 69,2 ±23,72 139,1 ±50,43 % 100 100 100 100 PGM 18 121,6 + 14,54 46,7 + 7,99 72,8 ±22,20 141,4 ±40,57 % 104 102 105 102 1700 18 125,5 + 19,44 42,9 ±9,82 76,4 ±24,94 163,8 ±52,95 % 107 94 110 118 1637: N-sztearil-PGm nátriumsója 15 1645: N-kapriloil-PGM nátriumsója 1647: N-lauroil-PGM nátriumsója 1665: N -oleoü-PGM nátriumsója 1700: N-pivaloü-PGM nátriumsója 1640: N-benzoü-PGM nátriumsója 20 1646: N-kaprinoil-PGM nátriumsója 1648: N-palmitoil-PGM nátriumsója 1668: N-acetil-PGM nátriumsója Statisztikusan szignifikáns növekedést a lép tömegében N-sztearoil-PGM nátriumsója és N-oleo- 25 ü-PGM nátriumsója adagolásakor találtunk (13%, illetve 21% a kontroll értékre vonatkoztatva). Relatív növekedést találtunk a lép tömegében N-benzoil- PGM, N-lauroil-PGM és N-pivaloil-PGM nátriumsójának adagolásakor, bár a kontroll érétkre vonat- 30 koztatott különbség nem volt szignifikáns, azonban világosan kifejezhető tendencia mutatkozott az említett származékok aktivitásának javulásában. A lép limfociták számának változása (abszolút szám 1 miben) származékonként változó volt. Abban az egér- 35 csoportban, amelyek N-lauroil-PGM nátriumsóját kapták, a kontrollértékre vonatkoztatott 20% szignifikáns csökkenés volt megfigyelhető. AzN-kaproil-PGM nátriumsójával kezelt egereknél a lép limfociták számában 19% statisztikusan szignifikáns 40 emelkedés volt megfigyelhető. 4-6% csökkenés volt megfigyelhető a lép limf ociták számában azoknál az egereknél, amelyek pivaloil- és acetilszármazékot kaptak, míg 3-9% emelkedés volt megfigyelhető azokban az egerekben, amelyek oleoil-, kaprinoil- és 45 palmitoil-származékot kaptak. Bizonyos tendencia volt megfigyelhető a változásokban, ez azonban nem volt statisztikusan szignifikáns. Sztearoü- és benzoü-származékok nátriumsójának adagolása esetén lép limfociták számára gyakorolt hatás nem 50 volt megfigyelhető. Gyakorlatilag mindegyik származék emelkedést okozott a PFC számban, amely 10 és 66% között mozgott a kontroll értékre számítva. Statisztikusan szignifikáns különbség azonban csak a benzoü-, lauroü- és palmitoil-származék nát- 55 riumsójánál volt megfigyelhető. Mindegyik származék fokozta a PFC-aktivitást, amint ez látható a lép limfociták számából, és amely 9 és 75% között változott a kontroll egércsoport értékeire vonatkoztatva. Statisztikusan szignifikáns különbség a lauro- 60 il-származék eseté volt megfigyelhető. VUágosan kifejezhető fokozó hatás volt megfigyelhető a benzoil- és acctü-származék esetén, a különbség a kontroll értékekre vonatkoztatva gyakorlatilag elérte a statisztikusan szignifikáns értéket (0,5 0,1). 65 A kapott eredményekből látható, hogy a peptidoglükán monomer összes vizsgált N-acü-származéka immunstimuláló aktivitással rendelkezik, az egyes származékok azonban hatékonyságukban eltérőek. A limfociták számában és a lép tömegének emelkedésében kapott eltérő eredmények egyik magyarázata a PGM és a találmány szerinti eljárással előállított N-acü-származékok celluláris immunrendszerre gyakorolt különböző hatásmechanizmusa lehet. A másik ok lehet az, hogy a hatásmechanizmusuk hasonló, eltérő azonban a valóságos aktivitásuk. A humorális immunitásra gyakorolt hatás nyüvánvaló a PFC aktivitásban bekövetkezett változásból, és bizonyos fokig eltér a lép limfociták számára gyakorolt hatástól. Az általános PFC aktivitásra kifejtett szignifikáns hatás volt megfigyelhető a benzoil-, lauroil- és palmitoü-származékok esetén, amelyek nem okoztak jelentős változást vagy csökkenést a limfociták számában 1 mg lépszövetben. A PGM molekula szerkezeti módosítása új és meglepő biológiai aktivitást eredményezett, amelyet kétféleképpen igazoltunk: a PGM lauroü- és kaprüoü-származéka szignifikáns hatást gyakorolt a celluláris immmunválaszra, másrészt a PGM benzoü-, lauroü- és palmitoü-származéka szignifikánsan hat a humorális immunitásra. Az eredmények a PGM lauroil származékának jelentős aktivitását igazolják, amely a celluláris és humorális immunitásra kifejtett hatás következménye, emellett jelentős aktivitásnövekedést mutatott az eredeti PGM- re vonakoztatva, ugyanolyan koncentrációban adagolva. A találmány szerinti eljárást a következő példákkal szemléltetjük a korlátozás szándéka nélkül. 1. példa N-acetil-PGM nátriumsójának előáüítása 500 mg (0,495 mmól) PGM 7 ml vízzel készült oldatához hozzáadunk 2,75 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot, és az elegyet jégfürdőn 5 °C-ra hűtjük. A lehűtött oldathoz cseppenként hozzáadunk 2,75 ml (29 mmól) ecetsavanhidridet, és az elegyet 20 *C-on 24 óra hosszat keverjük. Ezután az elegyet csökkentett nyomáson bepároljuk, így 0,95 g olajos terméket kapunk, amelyet 2,5 ml vízben feloldunk, és 150 ml Sephadex G-25 oszlopon vízzel eluálva elválasztunk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és liofüizáljuk. Kitermelés: 490 mg (92%). O.p.: 186-188 “C,UVmax(H20) (nm):202, 4
