202284. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új azoxiszármazékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 202284 B 2 8. IR abszorpciós spektrum A kloroformos oldatban mért IR abszorpciós spektrumokat a 2. és 6. ábrákon mutatjuk be. 9. 1H-NMR spektrum A deuterokloroformos oldatban mért *H-NMR spektrumokat a 3. és 7. ábrákon mutatjuk be. 10.13C-NMR spektrum A deuterokloroformos oldatban mért 13C-NMR spektrumokat a 4. és 8. ábrákon mutatjuk be. 11. Oldószerekben való oldahatóság Mindkét vegyület oldható kloroformban, acetonban és metanolban, oldahatatlanok vízben. 12. Színreakciók Mindkét vegyület pozitív színreakciót adkálium-permagnáttal reagáltatva, negatív színreakciót adnak ninhidrinnel reagáltatva. 13. Vékonyrétegkromatográfia: Rf Futtatóelegy (A) 0,53 (B) 0,22 benzol/etll-acetát (10:1) (A) 0,38 (B) 0,28 kloroform Lemez: szilikagél lemez F254 (Merck & Co.) 14. Szerkezeti képlet A fenti fizikokémiai jellemzők alapján a KA- 7367A és a KA-7367B vegyületek szerkezeti képletét az (IA), illetve az (IB) képlet szerintinek tartjuk. 15. Gombaellenes hatás A következőkben a vizsgált anyagok különféle enmicétákra vonatkozó növekedést gátló minimális koncentrációját (MIC) adjuk meg: Teszt mikroorganizmus MIC (|4g/ml) (A) (B) Candida albicans 1,6 50 Aspergillus fúmigatus 6,25 100 Cryptococcus neoformans 3,2 100 Trichoptyon mentagrapytes 6,25 100 Trichophyton rubrum 3,2 100 Tenyésztő közeg: Sabouraud dextróz agar Tenyésztési körülmények: 27 °C, 2-4 nap Ha a találmány szerint előállított vegyületek fenti tulajdonságait az ismert anyagok megfelelő tulajdonságaival összehasonlítjuk, nem találunk megjegyzést, így a KA-7367A és KA-7367B vegyületeket új vegyületeknek tekintjük. A fenti adatoknál az (A) jelölés a KA-7367A vegyületre és a (B) jelölés a KA-7367B vegyületre vonatkozik. Az 1, 2, 3 és 4. ábrák a KA-7367A vegyületre, míg az 5, 6, 7 és 8. ábrák a KA-7367B vegyületre vonatkoznak. A KA-7367A és KA-7367B vegyületek kémia úton egymásba átalakíthatók. A KA-7367A vegyület redukálószer hatására KA-7367B vegyület oxidálószer hatására KA-7367A vegyületté alakul. Redukálószerként alkalmazhatunk például nátriumbór-hidridet, kálium-bór-hidridet, lítium-bór-hidridet, vagy diboránt. A redukálást a KA-7367A vegyületnek 1-10 ekvivalens redukálószerrel szerves oldószerben, például alkoholban, éterben, szénhidrogénben, halogénezett szénhidrogénben, dimetil-szulfoxidban vagy dimetil-formamidban 0 és 100 ’C közötti hőmérsékleten néhány perc és néhány óra közötti időtartamon át való keverésével végezzük. Oxidálószerként alkalmazhatunk például piridinium-dikromátot, piridinium-klór-kromátot, krómsavakat vagy mangán-dioxidot. Az oxidálást a KA-7367B vegyület és 1-10 ekvivalens oxidálószer szerves oldószerben - például az előzőekben említett oldószerek valamelyikében - 1 óra és néhány nap közötti időtartamon át, előnyösen katalizátor - például piridinium-trifluor-acetát - jelenlétében való keverésével végezzük. A következőkben a találmány példákban mutatjuk be közelebbről. 1. példa 1% oldható keményítőt, 1% glukózt, 1% szójabablisztet, 0,5% kukoricalekvárt, 0,05% magnézium-szulfát-heptahidrátot, 0,3% kalcium-karbonátot és 0,0005% kobalt-klorid-hexahidrátot tartalmazó, pH-7,5-ös folyékony tápközeget burgonya-dextróz agar ferdecsövön tenyésztett Streptomyces sp. KC- 7367-val oltunk be. A beoltott tápközeget 28 °C hőméréskleten 2 napon át tenyésztve anyakultúrát nyerünk. 30 literes fermentorba 10 liter folyékony, pH-7,5-ös tápközeget töltünk, amely tápközeg 1% oldható keményítőt, 0,5% polipepton S-t, 0,2% élesztőtraktumot, 0,05% magnézium-szulfát-heptahidrátot, 0,0005% kobalt-klorid-hexahidrátot és 0,2% gyapotmagolajat tartalmaz. Ezt a tápközeget 100 ml, az előzőek szerinti készített anyakultúrával beoltjuk, és a tenytésztést 28 °C hőmérsékleten 2 napon át folytatjuk 300 ford/perc keverés és 5 liter/perc levegőztetés mellett. A tenyésztés befejezése után a fermentlevet leszűrjük, a kapott 40 liter szűrletet 6x70 cm-es, Diaion HP-20 töltetű adszorbeáltatjuk. Az oszlopot kevés, 50%-os vizes metanollal mossuk, majd metanollal eluáljuk. A Candida albicanas esetén gombaellenes aktivitást mutató frakciókat összegyűjtjük, és vákuumban szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot 200 ml etil-acetátban oldjuk, és 100 ml 5%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, 100 ml 0,02 n hidrogén-kloriddal, majd 100 ml vízzel mossuk. Az etil-acetátos fázist vákuumban szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot kevés metanolban oldjuk, majd gélkromatográfiás eljárással tisztítjuk. 2x90 cmes oszlopot, eluensként metanolt és töltetként Toyopearl TSK HW-40-t alkalmazunk. Az aktív frakciókat összegyűjtjük, és vákuumban bepároljuk. A visszamaradó anyagot prepatív vékonyrétegkromatográfiás eljárással tisztítjuk. Futtatóelegyként benzol és etilacetát 10:1 arányú elegyét alkalmazzuk, a kromatografálást szilikagél 60 F2J4 lemezen (a Merck & Co. terméke) végezzük. Az Rf-0,53 (KA-7367A) és az R(-0,22 (KA-7367B) értékű aktív foltokat összegyűjtjük, és mindkettőt etil-acetáttal eluáljuk. Az eluátumokat vákuumban bepároljuk. A viszamaradó anyagot metanolban oldjuk, majd gélkromatográfiásan tisztítjuk. 1,5x90 cm-es oszlopot, eluensként metanolt és töltetként Sephadex LH-20-t alkalmazunk. Az aktív frakciókat összegyűjtjük és vákuumban bepároljuk, így 30 mg KA-7367A-t és 3 mg KA-7367B-t nyerünk színtelen olaj formájában. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
