202281. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szelektálható és önállóan replikálódó rekobináns dezoxi-ribonukleinsav expressziós vektorok előállítására
1 HU 202281 B 2 ribonukleinsav molekulának az extrém példányszám növekedését, amelybe ilyen replikont építettünk be. Funkcionális polipeptid: kinyerhető, biológiailag aktív heterológ polipeptid vagy prekurzor, egy kinyerhető, bioaktív, heterológ polipeptidből és homológ polipeptid egy részéből vagy teljes egészéből álló polipeptid, vagy olyan kinyerhető, biológiailag inaktív fúziós polipeptid termék, amely egy heterológ polipeptidből és egy biológiai aktivitást megszüntető polipeptid részből áll, amely utóbbi specifikusan hasítható. Fuzionált géntermék: olyan kinyerhető, heterológ polipeptid, amely egy homológ polipeptid egy részét vagy teljes egészét tartalmazza. Az alábbiakban megadjuk a találmányhoz mellékelt ábrák leírását: 1-4. ábra: a PNM575 plazmid előállításának sematikus szemléltetése. 5-8. ábra: a PNM789B plazmid előállításának sematikus ábrázolása. 9. ábra: a pCZ1920 és pJRl plazmidok restrikciós térképe. 10. ábra: a pCZ112 plazmid restrikciós térképe. 11. ábra: a timozin alfa 1 szintetikus gén. 12. ábra: a T15 nukleotid fragmens szintézise. 13. ábra: a pTHal plazmid előállítása. 14. ábra: a proinzulin szintetikus gén. 15. ábra: a pHJ7A 4A1 plazmid előállítása. 16. ábra: a pHI104 plazmid előállítása. A találmány szelektálható és autonóm replikálódó rekombináns dezoxi-ribonukleinsav expressziós vektorokra vonatozik, amely vektorok tartalmaznak: a) egy runaway replikont, és b) olyan transzkripciós és transzlációs aktivációs szekvenciát, amely biológiailag aktív szarvamarha növekedési hormon-származékot meghatározó génnel leolvasási fázisban van, és amely gén az alábbiakban megadott lehet: (1) 5’ ATG AAA GGG AAT TCT ATG GCC TTC I I 11 II III I I I I I I II I I I I III 3’ TAC TTT CCC TTA AGA TAC CGG AAG CCA GCC ATG TCC TTG TCC GGC 3’ III II I I I I I I I I I I III III -R-Rl GGT CGG TAC AGG AAC AGG CCG 5’ (2) 5’ ATG GAT GAT AAG TTT CCG GCT ATG III I I I II I I I I I I I I I I III III 3’ TAC CTA CTA TTC AAA GGC CG A TAC TCT CTG TCC GGC 3’ III III III III -R-Rl AGA GAC AGG CCG 5’ (3) 5’ ATG TTT CCA GCC ATG GCT CTA III I I I I I I III I I I I I I I I I 3’ TAC AAA GGT CGG TAC CG A GAT TCT GGT 3’ III III -R-Rl AGA CCA 5’ (4) 5’ ATG TTC CCA GCT ATG TCT CTA I II I I I III II I I II I II III 3’ TAC AAG GGT CG A TAC AGA GAT TCT GGT 3’ III III -R-Rl AGA CCA 5’ (5) 5’ ATG GAT TIT CCG GCT ATG TCT I I II I I III I I I I I I I I I III 3’ TAC CTA AAA GGC CGA TAC AGA CTG TCC GGC 3’ III III III -R-Rl GAC AGG CCG 5’ (6) 5’ ATG TTT CCA GCT ATG TCT CTA III III III I I I I I II II III 3’ TAC AAA GGT CGA TAC AGA GAT TCT GGT 3’ III III -R-Rl AGA CCA 5’ (7) 5’ ATG GTT TTT CCG GCT ATG TCT III III III I I I I II I I I III 3’ TAC CAA AAA GGC CGA TAC AGA CTG TCC GGC 3’ III III III -R-Rl GAC AGG CCG 5’ or (8) 5’ ATG GCT TTT CCG GCT ATG TCT v I I II 1 I III I I I I I II I I III 3’ TAC CGA AAA GGC CGA TAC AGA CTG TCC GTC 3’ ?r: III III III -R-Rl »■ GAC AGG CAG 5’ ahol: A dezoxi-adenil-csoport, G dezoxi-guanil-csoport, ír C dezoxi-citidil-csoport, T timidilcsoport, R egy olyan dezoxi-ribonukleinsav szekvencia, amely a szarvasmarha növekedési hormon 9 (leucin)- 191 (fenil-alanin) aminosavát kódolja, továbbá, ahol R1 olyan dezoxi-ribonukleinsav szekvencia, amely egy transzlációs stop jelet határoz meg, és amely az alábbi lehet: 5’ TAA 3’ 5’ TAG 3’ III III 3’ ATT 5’ 3’ ATC 5’, vagy 5’ TGA 3’ I I I 3’ ACT 5’. A találmány vonatkozik továbbá a fentiekben ismertetett transzfománsaira, az új vegyületekne, termékekre és ezek felhasználására. A találmány értelmében az alábbi Xbal-HgiAI dezoxi- ribonukleinsav linker szekvenciákat egymástól függetlenül ligáljuk a pCZIOl plazmid 10,2 kb nagyságú BamHI-Xbal és a 0,6 kb nagyságú BamHI-HgiAI fragmenseihez. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
