202249. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás 2-dezoxi- 2',2'-difluor-nukleozidok előállítására
1 HU 202249 B 2 A vizes oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, és így 9,67 g 2’-dezoxi-2’,2’-difluor-timidint kapunk olaj alakjában. A terméket HPLC kromatográfiával azonosítjuk, autentikus standardot alkalmazva. A HPLC vizsgálat szerint a tennék a 2’-dezoxi-2’,2’-difluor-timidin 1,2:1 arányú ct/ß anomer keveréke. 17. példa Az 1 -(5-Etil-2,4-dioxo-1 H,3H-pirimidin- l-il)-2’dezoxi-2’,2’-difluor-ribóz 1,1:1 arányú ct/ß elegyének előállítása. 50 ml-es háromnyakú lombikba 25 ml 1,2-diklóretánt, majd 2,0 g (4,4 mmól) 2-dezoxi-2,2-difluor- D-eritro-pentafuranóz-3,5- dibenzoát-l-metán-szulfonátot (előállítása a 15. példa szerint) 2,74 g (9,6 mmól) 5-etil-2,4-bisz-(trimetil-szilil-oxi)-pirimidint (előállítása a 15. példában a bisz-trimetil-szilil-uracil reagens előállításához hasonló módon) és 1,17 g (5,3 mmól) trifluor-metil-szulfonil-oxi-trimetil-szilánt adunk. Az oldatot 8,5 órán át visszafolyatás közben forraljuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük, és 3 ml metanolt adunk hozzá. Az 1,2 diklór-etánt csökkentett nyomáson bepároljuk, és a maradékot etil-acetátban oldjuk, majd az oldatot egymás után telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és telített nátriumklorid-oldattal mossuk. A szerves oldatot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, a szárítószert kiszűrjük, majd csökkentett nyomáson bepárolva 1,94 g olajat kapunk. Az olaj 0,7 g-nyi mennyiségét 40 ml metanolban oldjuk. Az oldatot 0 °C hőmérsékletre hűtjük, és 15 percen át ammónia gázt buborékoltatunk át rajta, majd a kapott oldatot egy éjszakán át 0 'C hőmérsékleten keverjük. Másnap az illékony komponenseket csökkentett nyomáson lepároljuk, és a maradékot metilén-kloriddal trituráljuk. Ily módon további feldolgozás után 0,137 g l-(5-etil-2,4-dioxo-lH,3H-pirimidin-l-il)-2’-dezoxi-2’,2’-difluor-ribózt kapunk. A terméket HPLC kromatográfiával azonosítjuk, autentikus standardot alkalmazva. A HPLC vizsgálat szerint a termék a cím szerinti vegyület 1,1:1 arányú a/ß anomer keveréke. 18. példa Az l-[5-(2-Bróm-etenil)-2,4-dioxo-lH,3H-pirimidin-l-il]-2’-dezoxi-2’,2’-difluor-ribóz 1,4:1 arányú cx/ß elegyének előállítására. 25 ml-es háromnyakú lombikba 8 ml 1,2-diklóretánt, majd 1,67 g (4,6 mmól) 5-(2-bróm-etenil)-2,4- bisz-(trimetil-szilil-oxi)-pirimidint (előállítása a 15. példában a bisz-trimetil-szilil-uracil előállításához hasonló módon), 1,88 g (4,1 mmól) 2-dezoxi-2,2-difluor-D-eritro-pentafuranóz-3,5- dibenzoát-l-metánszulfonátot (előállítását lásd a 15. példában) és 1,08 g (4,8 mmól) trifluor-metil-szulfonil-oxi-trimetil-szilánt adunk. Az oldatot 3 órán át visszafolyatás közben forraljuk, szobahőmérsékletre hűtjük, és az 1,2-diklór-etánt desztillálással eltávolítjuk. Ezután az elegyhez 200 ml etil-acetátot és 100 ml vizet adunk. A fázisokat elválasztjuk, és a szerves fázist vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk, a szárítószert kiszűrjük, majd csökkentett nyomáson bepárolva 2,46 g sárga olajat kapunk. Az olajat 5 tömeg %-os toluolos etil- acetát-oldatban oldjuk, majd Waters Prep 500A kromatográfiás oszlopra töltjük. Az elucióhoz 6 1 5-25 tömeg %-os toluolos etilacetát gradienst alkalmazunk, és így a tiszta a-anomert, a tiszta ß-anomert és az a/ß-anomert elegyet tartalmazó frakciókat nyerünk. Az l-[5-(2-bróm- etenil)-2,4-dioxo-lH,3H-pirimidin-l-il]-2’- dezoxi-2’,2’difluor-ribóz védett termék teljes kitermelése 1,48 g, és a termék anomer aránya HPLC kromatográfiával meghatározva 1,4:1 a/ß. A védett termékeket a 7. példában leírt eljárás szerinti szabad analógjává alakíthatjuk. 19. példa Az l-[5-(2-Klór-etenil)-2,4-dioxo-lH,3H-pirimidin-l-il]-2’-dezoxi-2’,2’-difluor-ribóz körülbelül 1:1 a/ß elegyének előállítása. 25 ml-es háromnyakú lombikba 10 ml 1,2-diklóretánt, majd 0,19 g (0,593 mmól) 5-(2-klór-etenil)- 2,4-bisz-(trimetil-szilil-oxi)- pirimidint (előállítása hasoló módon történik, mint a 15. példában a bisz-(trimetil-szilil)-uracil reagensé), 0,27 g (0,593 mmól) 2- dezoxi-2,2-difluor-D-eritro-pentafuranóz- 3,5-dibenzoát-l-metán- szulfonátot (előállítása a 15. példa szerint) és 0,125 ml (0,65 mmól) trifluor-metil-szulfonil-oxitrimetil-szilánt adunk. Az oldatot egy éjszakán át visszafolyatás közben forraljuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük. Ezután metanolt, majd 1 normál nátrium-hidroxidot adunk hozzá, míg pH-5 értékű, kétfázisú oldatot kapunk. A kétfázisú oldatot 25 ml metilén-kloriddal hígítjuk, és a fázisokat elválasztjuk. A vizes fázist 25 ml metilén-kloriddal extraháljuk, és a kapott extraktumot a szerves fázissal egyesítjük, az egyesített oldatot 15 ml telített nátrium-kloridoldattal, majd kétszer 15-15 ml vízzel mossuk. A mosott oldatot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, a szárítószert kiszűrjük, és az oldatot csökkentett nyomáson bepárolva 0,15 g színtelen olajat kapunk. Az olajat 3 ml 5 tömeg %-os toluolos etil-acetát-oldatban oldjuk, majd Michel-Miller HPLC oszlopra töltjük. 5 tömeg %-os toluolos etil-acetátoldattal végzett elucióval a lényegében tiszta a-anomert, a lényegében tiszta ß-anomert és az a/ßanomer elegyet kapjuk. A frakciók HPLC vizsgálata azt mutatta, hogy az l-[5-(2-klór-etenil)-2,4-dioxolH,3H-pirimidin-l-il]-2’- dezoxi-2’,2’-difluor-ribóz védett analógjának anomer aránya körülbelül 1:1 a/ß. A védett terméket a 7. példában leírt módszerrel a szabad cím szerinti termékké alakíthatjuk. 20. példa 98,0% tisztaságú ß-2’-dezoxi-2’,2’difluor-citidinhidroklorid előállítása 1730 g, 7. példa szerinti előállított 2’-dezoxi-2’,2’difluor-citidin 1:1 arányú a/ß-anomer keveréket 8 1 70 °C hőmérsékletű izopropanolban oldunk. Az oldathoz mólegyenértéknyi tömény sósavat öntünk egy adagban, és a szilárd anyagot kristályosítjuk. Az elegyet ezután szűrjük, és a szűredéket 5 1 0 'C hőmérsékletű izopropanol-hexán (3:2) eleggyel mossuk, majd vákuumban szárítjuk, és így 1270 g, körülbelül 1:1 a/ß-anomer arányú 2’,-dezoxi- 2’,2’difluor-citidin-hidroklorid keveréket kapunk. Az így előállított, 1260 g hidroklorid-sót 6 1 meleg vízben oldjuk. Az összes szilárd anyag feloldódása után az oldatot 22 °C hőmérsékletre hűtjük, és 72 1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
