202249. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás 2-dezoxi- 2',2'-difluor-nukleozidok előállítására
1 HU 202249 B 2 két 100 ml-es kerekfenekű lombikba helyezünk, amely 50 ml forró (50 °C) vizet tartalmaz. Nátrium-hidroxidot adunk hozzá (2 n), amíg a víz pH-ja mintegy 3,0 lesz, ekkor az összes szilárd anyag feloldódik. A vizes oldat pH-ját mintegy 8,2-re emeljük, 5 n nátrium-hidroxidot alkalmazva. A bázisos oldatot hagyjuk lehűlni szobahőmérsékletre (22 °C), majd egy éjszakán át hűtjük. A kicsapódott szilárd anyagot vákuumszűréssel összegyűjtjük, mossuk 5 ml hideg, 8,5 pH-jú vízzel, és vákuum-kemencében szárítjuk 40 °C hőmérsékleten, így kapunk 1,65 g olyan terméket, amelyet a 7. példában leírt HPLC technikát alkalmazva 97,7%-os tisztaságú ß-2’-dezoxi-2’,2’-difluor-citidinnek mérünk. 13. példa 98,8% tisztaságú ß-2’dezoxi-2’,2’-difluor-citidin előállítása 1:1 a/ß 2’-dezoxi-2’,2’difluor-citidin anomer keverékből. 17 ml forró (50 °C) vízhez hozzáadunk 8,4 g, a 11. példában leírt eljárás szerint készített 2’-dezoxi- 2’,2’-difluor-citidin 1:1 a/ß anomer keveréket. Az így létrejött vizes oldat pH-ját 8,2-re emeljük 2 n nátrium-hidroxiddal. A bázisos oldatot lehűtjük szobahőmérsékletre (22 'C), majd egy éjszakán át hűtjük. A kicsapódott szilárd anyagot vákuumszűréssel összegyűjtjük, mossuk 5 ml hideg, 8,5 pH-jú vízzel, és vákuum- kemencében szárítjuk 40 °C hőmérsékleten, így 1,4 g olyan terméket kapunk, amelyet a 7. példában leírt HPLC vizsgálati technikával 98,8% tisztaságú ß-2’-dezoxi-2’,2’-difluor-citidinnek mérünk. 14. példa 100%-os tisztaságú ß-2’-dezoxi-2’,2’-difluor-citidin-hidroklorid előállítása 99,7% tisztaságú ß-2’-dezoxi-2’,2’-difluorcitidinből. 500 ml-es négynyakú, kerekfenekű lombikba, amely 100 ml forró (55 °C) vizet tartalmaz, lassan hozzáadunk 20,0 g 97,7% tisztaságú ß-2’-dezoxi- 2’,2’-difluor-citidint, amelyet a 12. példa eljárása szerint állítottunk elő. Reagens tisztaságú koncentrált sósavat adunk egyidejűleg a lombikba olyan sebességgel, hogy a vizes oldat pH-ját 3,0 értéken tartsuk a difluor-citidin hozzáadása során. Miután a difluorcitidin hozzáadása teljessé vált, további 13 ml koncentrált sósavat adunk hozzá. Az oldatot 0 °C hőmérsékletre hűtjük jégfűrdőben és ezen a hőmérsékleten kevertetjük 3 órán át. A kicsapódott szilárd anyagot vákuuszűréssel összegyűjtjük, egymás után mossuk 5 ml 1,0 pH-jú vízzel és 10 ml acetonnal, és vákuum-kemencében szárítjuk 45 °C hőmérsékleten, így kapunk 21,3 g terméket, amelyet a 7. példában leírt HPLC vizsgálati technikával 100% tisztaságú ß-2’-dezoxi-2’,2’-difluor-citidin-hidrokloridnak mérünk. A terméket jellemezzük NMR elemzéssel is 300 mHz-es készüléken, ez ugyanolyan spektrummal bír, mint a 8. példában leírt termék. 15. példa 2’-Dezoxi-2’,2’-difluor-uridin 1,5:1 arányú a/ß elegyének előállítása 50 ml-es, háromnyakú lombikba 15 ml 1,2-diklór-etánt, majd 1,0 g (8,92 mmól) uracilt, 8 ml (37,9 mmól) hexametil-diszilazánt és 118 mg (0,872 mmól) ammónium-szulfátot adunk. Az oldatot 3,5 órán át visszafolyatás közben forraljuk, majd az oldószert ledesztilláljuk, és így olajat nyerünk. Az olajat 1,2- diklór- etánban oldjuk, és az oldószert ismét ledesztilláljuk. Az 1,2-diklór-etános oldást és olajjá történő lepárlást még kétszer ismételjük. Végül a keletkezett, lényegében bisz-trimetil-szilil-uracilból álló olajat 15 ml 1,2-diklór-etánban oldjuk, szobahőmérsékletre hűtjük, és nitrogén-atmoszférában egy éjszakán át állni hagyjuk. Másnap a fenti oldatot 1,4 ml trifluor-metil-szulfonil-oxi-trimetil-szilánnal elegyítjük. A kapott oldatot 20 percen át szobahőmérsékleten keverjük, majd 21,7 g (4,76 mmól) 2-dezoxi-2,2-difluor-D-eritro-pentafuranőz-3,5-dibenzoát-1 -metán -szulfonátot adunk hozzá. Ezt a vegyületet úgy állítjuk elő, hogy a 3. példa szerinti eljárással a laktont készítjük el, majd ezt a 4.526.988 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint alkohollá alakítjuk, végül az alkoholt ugyancsak a 4.526.988 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint alakítjuk át az 1-metil-szulfonáttá. Az oldatot 3,5 órán át visszafolyatás közben forraljuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük, és 150 ml vízzel, majd 50 ml 5 tömeg %-os nátrium-hidrogén-karbonát-olattal mossuk. A mosott oldatot vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és csökkentett nyomáson bepárolva 3,2 g gyantaszerű habot kapunk. A terméket HPLC kromatográfíával azonosítjuk, autentikus standardot alkalmazva. A HPLC vizsgálat szerint a termék a 2’-dezoxi-2’,2’-difluor-uridin védett analógjának 1,5:1 arányú a/ß anomer elegye. A védett termék a 7. példában leírt eljárással a szabad vegyületté alakítható. 16. példa 2’-Dezoxi-2’,2’-difluor-timidin 1,2:1 arányú a/ß elegyének előállítása 500 ml-es, háromnyakú lombikba 100 ml 1,2-diklór-etánt, majd 13,3 g (0,049 mól) bisz-trimetil-szilil-timint (előállítva a bisz- trimetil-szilil-uracil 15. példában leírt előállításához hasonlóan), 11,37 g (0,051 mmól) trifluor-metán-szulfonil-oxi- trimetilszilánt és 20,0 g (0,0438 mól) 2-dezoxi-2,2-difluor-D- eritro-pentofuranóz-3,5-dibenzoát-1 -metán-szulfonátot (a 15. példa szerint előállítva) adunk. Az olatot 4 órán át visszafolyatás közben forraljuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük, és jeget és 10 ml metanolt adunk hozzá. Az 1,2-diklór-etánt desztillálással eltávolítjuk, és 300 ml etil-acetátot és 200 ml 1 normál sósavat adunk az elegyhez. A két fázist elválasztjuk, és a szerves fázist telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk. A magnézium-szulfátot kiszűrjük, és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk, ily módon 17,4 g olajat kapunk. Az olajat 500 ml metanolban oldjuk. Az oldatot 0 °C hőmérsékletre hűtjük, majd 10 percen át ammónia gázt buborékoltatunk át rajta, ezután az oldatot hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni. Az oldatot ezután szobahőmérsékleten 22 órán át keverjük (6 órás keverés után további 15 percen át ammónia gázt buborékoltatunk át rajta). Az illékony komponenseket csökkentett nyomáson lepároljuk, és így színtelen olajat kapunk. Az olajat 100 ml vízben oldjuk, és a kapott oldatot kétszer 50-50 ml kloroformmal mossuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ll
