202248. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszeudo-primicin és komponensei, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 202248 B 2 9. példa 6.0 g (5,27 mmól) primicin-acetátot 400 ml n-butanolban szuszpendáíunk. A rendszerhez 1,0 g (3,1 mmól) tetrabutil-ammónium-bromidot adunk, és a reakcióelegyet állandó keverés közben két órán keresztül forraljuk. A melegítés befejezése után 5,0 ml ecetsavat adunk hozzá, majd vákuumban az oldószer teljes mennyiségét ledesztilláljuk. A visszamaradó szilárd anyagot 30 ml kloroformban eldörzsöljük. A szuszpenziót szűrjük, a kiszűrt anyagot melegítés közben 10 ml metanolban oldjuk. A teljes beoldódás után az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, majd állandó keverés mellett kb. 20 perc alatt 20 ml etil-formiátot csepegtetünk a rendszerhez. Az átalakulatlan primicin-acetát kicsapódik, melyet üvegszűrőn szűrünk. A szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot dietil-éterben eldörzsöljük. A szilárd anyagot szűrjük és 70 °C-on vákuumban tömegállandóságig szárítjuk. így 2,8 g (46,6%) pszeudo-primicin-acetátot nyerünk, melynek olvadáspontja: 106 °C. 10. példa 6.0 g (5,27 mmól) primycin-acetátot 360 ml nbutanol és 60 ml dietil-amin elegyében szuszpendálunk, majd állandó keverés közben 4,5 órán keresztül forráshőmérsékleten melegítjük. Ezután a reakcióelegyet vákuumban a felére bepároljuk, 5 ml ecetsavat adunk hozzá és vákuumban az oldószer teljes mennyiségét eltávolítjuk. A visszamaradó szilárd anyagot 10 ml metanolban oldjuk. Szükség esetén melegítést is lakalmazhatunk. A szobahőmérsékletű oldathoz állandó keverés közben 20 ml etil-formiátot csepegtetünk. Az átalakulatlan primycin-acetát kiválik a rendszerből, ezt üvegszűrő segítségével kiszűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk, s a maradékot dietil-éterben eldörzsöljük. A szilárd anyagot kiszűrjük és 70 °C-on vákuumban tömegállandóságig szárítjuk, így 2,8 g (46,6%) pszeudo-primicin-acetátot nyerünk, melynek olvadáspontja 106 °C. 11. példa 60.0 g (52,71 mmól) primicin-acetátot 400 ml piridinben forráshőmérsékleten 3,5 órán át melegítünk, majd a kapott oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékról kétszer 50 ml etanolt desztillálunk le. A visszamaradó anyagot melegítés közben 100 ml metanolban oldjuk, a szobahőmérsékletre visszahűlt oldathoz állandó keverés közben kb. 20 perc alatt 200 ml etil-formiátot csepegtetünk. Az átalakulatban primicin-acetát kiválik a rendszerből, ezt szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet vákuumban bepároljuk és a szilárd maradékot dietil-éterben eldörzsöljük. A szuszpenziót szűrjük. Az így kapott fehér színű anyagot 70 ’’C-on vákuumban tömegállandóságig szárítjuk, s 25 g (41,6%) pszeudo-primicin-acetátot nyerünk, melynek olvadáspontja 106 ’C. 12. példa 1.0 g (0,89 mmól) primicin-Ai-szulfátot (előállítása a 196 425 lsz. magyar szabadalom szerint történik) és 0,14 g (0,45 mmól) nyolc kristályvizet tartalmazó bárium-hidroxidot 13,5 ml metanolban szuszpendálunk. A lúg jobb oldódása érdekében a szuszpenzióhoz 5 3,5 ml vizet adunk. A reakcióelegyet állandó keverés mellett 2,5 órán keresztül forráshőmérsékleten melegítjük. A forró reakcióelegyhez 0,4 ml ecetsavat adunk, majd a forralást további 30 percig folytatjuk. A reakció során keletkező bárium-szulfátot a meleg 10 reakcióelegyből redős szűrővel kiszűrjük. A szűrletet vákuumban bepároljuk. (A bepárlás végső szakaszában fellépő habzást 2 ml n-butanol hozzáadásával szüntethetjük meg.) Az olajos maradékot enyhe melegítés közben 1,6 ml metanolban oldjuk. Az oldatot szo- 15 bahőmérsékletűre hűtjük vissza, majd állandó keverés mellett kb. 10 perc alatt 3,4 ml etil-formiátot csepegtetünk a rendszerhez. Az átalakulatlan primycinacetát kiválik az oldatból, melyet üvegszűrőn kiszűrünk. A szűrletet vákuumban bepároljuk. A szilárd 20 maradékot 10 ml dietil-éterben eldörzsöljük, majd szűrjük. A kapott fehér színű port vákuumban 70 "C-on szárítjuk. így 0,43 g (43%) pseudo-primycin- A[-acetátot nyerünk, melynek olvadáspontja 108 °C. 25 13. példa Pszeudo-primicin-acetát komponenseinek elválasztása oszlopkromatográfiás módszerrel. 1. Az oszlopkromatográfiás elválasztás 30 A felvitt minta: 6,8 g pseudo-primycin-acetát 30 ml eluensben oldva (előállítása az 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 vagy 11 példa valamelyike szerint történik. Oszlop: 3,6 cm átmérőjű, 90 cm hosszú gélágyat 35 készítünk, Kieselgel 60 (0,063-0,100 mm) Merck töltet alkalmazásával. A töltet készítésénél a szilikagélt az alkalmazott eluensben szuszpendáljuk. Eluens: kloroform-metanol-ecetsav-víz-9:6:3:4 térfogatarányú elegy alsó fázisa, melyet 1 térfogat% 40 metanollal stabilizálunk. Áramlási sebesség: 1,75 ml/perc Szedett frakciók térfogata: 10 ml A kapott frakciók hatóanyag-tartalmát vékonyréteg-kromatográfiával (VRK) vizsgáljuk. 45 2. A VRK-s vizsgálat Alkalmazott réteg: Kieselgel 60 F254 (Merck) Felvitt minta térfogata: lOjxl Futtató: kloroform:metanol:hangyasav:víz:formal- 50 dehid:n- butanol-130:53:6:9:3:3 térfogatarányú elegye Előhívó: klór-toluidin vagy 1%-os foszformalibdénsavat tartalmazó etanol A kromatográfiásan azonosnak minősülő frakciókat egyesítjük, majd 10 ml n-butanol hozzáadása után vá- 55 kuumban bepároljuk. A szilárd maradékot dietil-éterben eldörzsöljük, szűrjük. A kapott fehér színű port 70 °C-on tömegállandóságig szárítjuk. Ily módon a főbb komponenseket a következő megosztásban kapjuk: Komponens Tömeg (g) Hozam (%) Op.fC) «0 pszeudo-primic in-A! -acetát 1,60 23,5 108 +38,4 pszeudo-primicin-Aj-acetát 0,20 2,9 109 +48,0 6
