202245. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a mitomicin (foszfono-oxi-alkil)-származékai és e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 202245 B 2 A találmány tárgya eljárás új mitomicin-N7-(alkilfoszfát)-származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. E vegyületek daganatellenes hatásúak, s így terápiásán alkalmazhatók. A mitomicin és a porfiromicin kémiailag szoros rokonságban álló, daganatellenes hatású antibiotikumok. Az (la) képletű mitomicin- C, azaz az olyan (I) általános képletű vegyület, amelyben X jelentése aminocsoport, és Z hidrogénatomot jelent, az Egyesült Államokban Mutamycin* kereskedelmi néven van forgalomban, és áttételes gyomor- és hasnyálmirigyadenokarcinóma terápiájára alkalmazzák más, engedélyezett kemoterápiás szerekkel alkotott kombinációkban. Az (Ib) képletű mitomicin-A olyan (I) általános képletű vegyület, amelyben X jelentése metoxicsoport, és Z hidrogénatomot jelent; az (Ic) képletű porflromicinben X aminocsoportot, Z metilcsoportot jelent; az Nla-metil-mitomicin-A (Id) képletében X metoxicsoportot, Z metilcsoportot jelent. Az alábbiakban N7-nek a 7-es helyzetben kapcsolódó nitrogénatomot, Nla-ának az aziridin-nitrogént jelöljük. Az (I) általános képletben szaggatott vonallal határolt molekularészt „mitozán”-nak nevezzük. Eddig is nagyszámú mitomicin-analóg származékot állítottak elő azzal a céllal, hogy kedvezőbb terápiás sajátságokkal rendelkező - így erősebb daganatgáltó hatású és/vagy enyhébb mieloszuppresszív hatású - vegyületeket találjanak, mint a mitomicin-C. Az irodalomban megjelent közlemények és szabadalmi leírások közül az alábbi, mitomicinszármazékokat ismertető közléseket tartjuk lényegesnek jelen bejelentésünk szempontjából. Iyengar és munkatársai ismertetik a (Ha), (Ilb) és (IIc) képletű vegyületeket [J. Med. Chem. 24, 975 (1981) és ugyantott 26, 16 (1983)], azaz olyan (II) általános képletű vegyületeket, ahol (IIA) esetében n értéke 2, R1 hidrogénatomot, R2 hidroxilcsoportot jelent; (Ilb) esetében n értéke 3, R1 hidrogénatomot és R2 hidroxilcsoportot jelent; és (IIc) esetében n értéke 3, R1 jelentése metilcsoport, R2 hidroxilcsoportot jelent. Kaneko és munkatársai a 4 642 352 számú Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban olyan (III) általános képletű motimicinszármazékokat írnak le, ahol R1 jelentése hidrogénatom, 1-6 szénatomos alkilcsoport, vagy megegyezik R7 jelentésével, és R7 többek között (R^O)2P(X)- vagy (Ra)2P(X)- általános képletű csoportot jelent, amelyben Ra jelentése például hidrogénatom, alkil-, cikloalkil- vagy arilcsoport; és Rb például alkil-, aril- vagy aralkilcsoportot jelent. Azt találtuk, hogy a (II) általános képletű vegyületek foszfátszármazékai a hidroxilcsoportot tartalmazó alapvegyülethez képest kedvezőbb daganatellenes hatással rendelkeznek, és toxicitásuk kisebb. A foszfátokat, mint potenciális „prodrug” anyagokat (gyógyszer-előanyagokat) Sinkula és Yalkowsky ismertetik „Rational for Design of Biologically Reversible Drug Derivatives” című rövid összefoglaló közleményükben [J. Pharm. Sei. 64, 181 és 189 (1975)]. Ismert daganatellenes szer például a camptothecin (lásd a 21-95, 394 és 21—95, 393 számú publikált japán szabadalmi bejelentéseket; a megfelelő Derwent Abst. száma 87-281015) vagy a daunorubicin foszfátszármazéka (4 185 111 számú Egyesült Állmok-beli szabadalmi leírás.) Mindezek alapján a találmány tárgya eljárás a (IV) általános képletű új vegyületek - ahol alk jelentése 2-4 szénatomos, egyenes vagy elágazó szénláncú alkiléncsoport; és e vegyületek alkálifémsóinak az előállítására. A találmány szerinti vegyületek daganatgáltó hatását állatkísérleti modelleken igazoltuk. Az 1. ábra mutatja a (Ha) és (V) képletű vegyület (az 1. példa szerint előállított vegyület) hatását egerek H2981 daganatának a növekvésére. Az ábrán nyilak mutatják azokat a napokat, amelyeken a hatóanyagokat adagoltuk. A 2. ábra mutatja a mitomicin-C, a (Ila) és (V) képletű vegyületek, valamint az alkálikus foszfatázemzimmel előkezelt (V) képletű vegyület citotoxikus hatásait. A találmány szerinti vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy az (Ib) képletű mitomicin-A-t egy (HO)2P(X’)Y-aÚc-NH2 általános képletű (amino-alkil)-foszfáttal reagáltatjuk, ahol alk jelentése a fentiekben meghatározott, X’ és Y pedig oxigénatom. E reakciót általában megfelelő oldószerben - például metanolban - vagy oldószerkeverékben, például víz és metanol keverékében, szobahőmérsékleten végezzük. A reakcióelegyhez tercier aminbázist, például trietil-amint adhatunk. Az így kapott terméket bázissal kezelve sójává alakíthatjuk; például nátrium- hidrogén-karbonáttal a (IV) általános képletű mitomicin-N7-(alkilfoszfát)-származékok dinátriumsóit kapjuk. A kiinduló anyagként alkalmazott (2-amino-etil)-dihidrogén-foszfát kereskedelmi forgalomból beszerehető termék; egyéb (amino-alkil)- foszfátok előálítása megtalálható például a következő helyeken: Helv. Chim. Act. 39, 1455 (1956); Helv. Chim. Acta 44, 1168 (1985); Acta Chim. Scand. 13, M79 (1959); és a 3 501 557 számú Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban. A biológiai hatás vizsgálata Az 1. példa szerint előállított (V) képletű vegyület daganatellenes hatását 4-6 hetes Balb C nu/nu nőstény egereken értékeltük ki (az egereket a Life Sciences, St. Petersburg, FI. intézménytől szereztük be). Az állatok jobb csípőjének hátsó oldalába szubkután úton H2981 emberi tüdődaganatot ültettünk. Pozitív kontrollként a (Ila) képletű vegyületet alkalmaztuk. A hatóanyaggal történő kezelést a 15. napon kezdtük (0. napnak tekintettük a daganatátültetés időpontját), amidőn a daganatok megközelítőleg 100 mm3 térfogatot érték el. A vizsgálandó vegyületeket 0,2 ml térfogatban [a (Ila) képletű vegyület esetében 1 mg/ml koncentrációban, az (V) képletű vegyület esetében 3 mg/ml koncentrációban, foszfáttal pufferolt konyhasóoldatban] intraperitoneálisan a 15., 21., 31. és 37. napokon fecskendeztük be. Eredményeinket az 1. ábra grafikusan mutatja. Az ábrából látható, hogy a 750 mm3 átlagos daganattérfogat eléréséhez szükséges időtartam 45 nap volt a (Ila) képletű vegyülettel, 63 nap az (V) képletű vegyülettel kezelt állatok esetében és 27 nap a kezeletlen kontrollcsoportban. Ennek alapján a foszforilezett vegyület daganatellenes hatása erősebb, mint a megfelelő (szabad) alkoholszármazéké. A (Ila) és (V) képletű vegyületek toxieitását Balb C nu/nu egereken meghatározva hasonlítottuk össze. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
