202243. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (cikloalkil-amino)-metilén-bisz(foszfonsav)-származékok, és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 202243 B 2 A normál kontroll csoportnak hasonló módon csak 0,1% marha szérumalbumint tartalmazó fiziológiás konyhasóoldatot injektálunk. A PTH beadása után 45 perccel a patkányokat éterrel altatjuk, majd a hasüreget megnyitjuk, és a hasüregből vákuumos vérvevő csővel vért veszünk. A levett vért 3000 fordulat/perccel, 4 °C-on 10 percen keresztül azonnal centrifugáljuk, és a szérumot elválasztjuk. A szérum kalciumion-koncentrációját Ca2+méterrel (Sera 250, gyártja a Horiba Manufacturing Co.) azonnal meghatározzuk. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületeket fiziológiás sóoldatban (pH 7,4) oldjuk, nátrium-hidroxid és sósav segítségével, és 2 ml/kg dózistérfogatban szubkután módon adagoljuk a kívánt dózisokban a PTH beadása előtt 72 órával. A normál kontroll csoportnak hasonló módon fiziológiás sóoldatot vagy desztillált vizet adunk. Összehasonlító vegyületként lazac kalcitonint (SCT, gyártja az Armour Co.) adagolunk. Az SCT-t szubkután módon adjuk, 2 ml/kg dózistérfogatban, a PTH injektálása előtt 30 perccel. Az egyes csoportok esetén kapott eredményeket az átlagérték ± S.E. (standard hiba) megadásával tűntetjük fel. A csoportok közötti összehasonlítást egyutas variancia-analízissel végezzük. A szignifikancia szintjét 5%-nál állapítjuk meg. A szubkután adagolás esetén kapott eredményeket az 1. táblázatban foglaljuk össze. 1. táblázat: Hiperkalcémia elleni hatás s.c. adagolással Vegyület Dózis (mg/kg) N Szérum Ca2+ (mmól/1) koncentráció normál kontroll 5 1,42±0,02 kontroll-5 1,48±0,03 8. példa szerinti 0,3 5 1,2510,02** vegyület 1,5 5 1,1210,02** normál kontroll-5 1,41+0,02** kontroll-5 1,46+0,02 15. példa szerinti 0,03 5 1,37±0,02** vegyület 0,1 5 1,20±0,02** normáll kontroll-5 1,34+0,02** kontroll — 5 1,43+0,01 14. példa szerinti 0,1 5 1,34±0,02** vegyület 0,3 5 1,21±0,01** 5. példa szerinti 0,1 5 1,12±0,01** vegyület 0,3 5 0,97±0,02** normál kontroll-5 1,36±0,01** kontroll — 5 1,45±0,02 9. példa szerinti 0,1 5 1,3110,01** vegyület 0,3 5 1,19+0,01** 10. példa szerinti 0,1 5 1,35+0,01** vegyület * 0,3 5 1,2210,01** normál kontroll — 5 1,3510,02** kontroll-5 1,4410,01 11. példa szerinti vegyület 1,0 5 1,3510,02** normál kontroll-5 1,3810,01** kontroll-5 1,4810,02 Vegyület Dózis (mg/kg) N Szérum Ca2+ (mmól/1) koncentráció 7. példa szerinti vegyület 0,3 5 1,4010,02** 1,0 5 1,2910,01** 6. példa szerinti 0,3 5 1,3310,03** vegyület 1,0 5 1,1210,03** normál kontroll-5 1,3810,01** kontroll-5 1,4910,00 SCT 0,3 NE 5 1,0710,02** átlagértékiS.E.*: P<0,05 **: P<0,01 NE: nemzetközi egység (2) PTH-indukált hiperkalcémia patkányban PTH-t (humán PTH 1-34, 30 pg/kg) injektálunk intravénásán kb. 3 hetes, hím Wistar patkányokba. A vérmintát az injektálás után 45 perccel vesszük. A kalciumion-koncentrációt Ca2+-méterrel mérjük a vérszérumban. A vizsgálandó vegyületeket szubkután módon vagy orálisan adagoljuk 3 nappal a PTH-injekció előtt. Az eredményeket átlagérték ± S.E. segítségével adjuk meg. A statisztikus szignifikancia értékeket egyutas ANOVA teszttel analizáljuk (*: p<0,05; **:p<0,01). A vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy a PTH növeli a szérum Ca2+ koncentrációját, valószínűleg a csontokból való kalcium felszabadítás által. A bisz(foszfonát)-ok - azaz az 5. példa szerinti vegyület (továbbiakban YM-21175-1) és az APD [a csont Paget-betegségének kezelésére kereskedelmi forgalomban lévő, (A) képletű vegyület, gyártja a Ciba-Geigy] dózistól függő módon gátolják a szérum Ca2+ koncentrációjának növekedését, ha patkányoknak szubkután módon vagy orálisan adagoljuk azokat, 3 nappal a PTH injektálása előtt. Az YM-21175-1 kb. 10-szer hatásosabb, mint az APD, mind szubkután, mint orális adagolás esetén. Az eredményeket a 2. táblázatban ismertetjük. 2. táblázat: YM-21175-1 és APD hatása a PTH-indukált hiperkalcémiára, patkányban Vegyület Dózis (mg/kg) N Szérum Ca2+ (mmól/1) koncentráció normál kontroll (-PTH) 5 1,4210,02 kontroll (+PTH)-5 1,4910,02 APD 0,03 s.c. 5 0,1 s.c. 5 1,4610,01 0,3 s.c. 5 1,4110,02* 30 p.o. 5 1,5010,02 100 p.o. 5 1,4210,02 300 p.o. 5 1,2210,02** YM-21175-1 0,01 s.c. 5 1,4410,02 0,03 s.c. 5 1,3610,02** 0,1 s.c. 5 1,1540,01** normál (-PTH) — 5 1,3510,02 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
